沙冬青脱水素基因的克隆及对烟草的遗传转化
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 1 引言 | 第8-15页 |
| ·脱水素的研究进展 | 第8-15页 |
| ·脱水素的性质特点 | 第8页 |
| ·脱水素的结构特征 | 第8-9页 |
| ·脱水素的分类 | 第9-10页 |
| ·脱水素的分布及组织、亚细胞定位 | 第10-11页 |
| ·脱水素在细胞内的运转 | 第11页 |
| ·脱水素的表达与调控 | 第11-13页 |
| ·脱水素的功能 | 第13-15页 |
| ·本项目研究目的、意义 | 第15页 |
| 2 沙冬青脱水素基因的克隆 | 第15-24页 |
| ·实验材料 | 第15-16页 |
| ·植物材料 | 第15页 |
| ·菌株和质粒 | 第15页 |
| ·主要试剂 | 第15-16页 |
| ·主要试剂配制 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16页 |
| ·实验方法 | 第16-20页 |
| ·沙冬青基因组DNA 的提取 | 第16-17页 |
| ·脱水素基因扩增引物的设计 | 第17页 |
| ·目的片段的扩增 | 第17-18页 |
| ·PCR 产物的回收、纯化 | 第18页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接 | 第18页 |
| ·大肠杆菌感感受态细胞的转化 | 第18-19页 |
| ·重组质粒的检测 | 第19-20页 |
| ·结果与分析 | 第20-24页 |
| ·脱水素基因的扩增 | 第20页 |
| ·目的基因的克隆及PCR 检测 | 第20-22页 |
| ·目的基因的序列测定 | 第22页 |
| ·沙冬青脱水素基因氨基酸序列的同源性比对 | 第22-24页 |
| ·讨论 | 第24页 |
| 3 脱水素基因植物表达载体的构建 | 第24-30页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·质粒与菌株 | 第24页 |
| ·酶及主要试剂 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-28页 |
| ·目的基因扩增引物的设计 | 第25页 |
| ·目的片段的PCR 扩增 | 第25页 |
| ·目的片段扩增产物的回收、纯化 | 第25页 |
| ·目的片段和表达载体的酶切及回收、纯化 | 第25-26页 |
| ·目的片段与载体大片段的连接 | 第26页 |
| ·连接产物的转化 | 第26页 |
| ·表达载体重组子的鉴定 | 第26-27页 |
| ·重组载体向农杆菌的导入 | 第27页 |
| ·农杆菌重组质粒的检测 | 第27-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-29页 |
| ·目的片段的扩增及回收、纯化 | 第28页 |
| ·目的片段及载体的酶切 | 第28-29页 |
| ·目的小片段与载体大片段的连接转化 | 第29页 |
| ·表达载体重组子的PCR 鉴定 | 第29页 |
| ·重组载体向农杆菌的导入及检测 | 第29页 |
| ·讨论 | 第29-30页 |
| 4 脱水素基因对烟草的转化 | 第30-35页 |
| ·材料 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-32页 |
| ·烟草外植体的准备 | 第30页 |
| ·侵染菌液的制备 | 第30-31页 |
| ·烟草叶盘的转化及其与农杆菌的共培养 | 第31页 |
| ·转化体的筛选和抗性小植株再生 | 第31页 |
| ·转基因植株的检测 | 第31-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-35页 |
| ·烟草叶盘的转化及抗性植株的再生 | 第32-34页 |
| ·转基因植株的PCR 检测 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35页 |
| 5 结论 | 第35-36页 |
| 致谢 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-40页 |
| 作者简介 | 第40页 |
