| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩略表 | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-21页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第21-27页 |
| 1 实验材料 | 第21-22页 |
| ·菌株、质粒与细胞 | 第21页 |
| ·引物合成和测序 | 第21页 |
| ·试剂盒、工具酶 | 第21页 |
| ·培养基与溶液 | 第21-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-27页 |
| ·真核细胞表达质粒载体的构建 | 第22-23页 |
| ·pRNATU6.1/Neo-VEGF siRNA质粒的构建 | 第22-23页 |
| ·抑癌因子PTEN的四环素诱导型反转录病毒载体PTEN/pRetro-on的构建 | 第23页 |
| ·人神经胶质瘤U251细胞的培养,转染和稳定转染细胞系的筛选 | 第23-24页 |
| ·Real-time PCR检测VEGF mRNA水平 | 第24-25页 |
| ·ELISA检测细胞培养上清中VEGF蛋白的分泌量 | 第25页 |
| ·MTT检测细胞的增殖活性 | 第25页 |
| ·Western blot免疫印迹分析 | 第25-26页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期进程 | 第26页 |
| ·细胞凋亡与caspase活性检测 | 第26页 |
| ·锚定依赖—非依赖性细胞生长与伤口愈合实验 | 第26-27页 |
| 第三章 实验结果 | 第27-39页 |
| ·重新引进野生型PTEN蛋白能有效的下调AKT磷酸化水平和抑制U251细胞的增殖,而瞬时转染的VEGF shRNA效果不明显 | 第27-30页 |
| ·重新导入的野生型PTEN蛋白能将U251细胞周期阻滞在G0/G1期,并促进细胞凋亡,而VEGF siRNA的作用并不明显 | 第30-34页 |
| ·VEGF基因敲除与PTEN蛋白重新导入对U251细胞锚定依赖性—非依赖性克隆形成及伤口愈合能力的效应 | 第34-37页 |
| ·PTEN表达联合VEGF基因敲除对体外肿瘤移植物表现出一个增效的抑制作用 | 第37-39页 |
| 第四章 讨论 | 第39-42页 |
| 参考文献 | 第42-49页 |
| 攻读学位期间公开发表的论文 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
