| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-18页 |
| ·课题研究的目的和意义 | 第11-12页 |
| ·国内外研究现状 | 第12-17页 |
| ·国内外生物农药研究进展 | 第12页 |
| ·球毛壳菌在植物病害生物防治上的应用 | 第12-13页 |
| ·生物防治相关葡聚糖酶 | 第13-16页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第16-17页 |
| ·课题来源及主要研究内容 | 第17-18页 |
| ·课题来源 | 第17页 |
| ·主要研究内容 | 第17-18页 |
| 第2章 材料与方法 | 第18-32页 |
| ·实验材料 | 第18-20页 |
| ·质粒和菌株 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18-19页 |
| ·酶和所用试剂 | 第19页 |
| ·常用贮液 | 第19页 |
| ·仪器设备 | 第19-20页 |
| ·引物设计 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-32页 |
| ·球毛壳菌β-1，3-葡聚糖酶基因（glu）克隆 | 第20-23页 |
| ·提取球毛壳菌RNA | 第23页 |
| ·cDNA的获得 | 第23-24页 |
| ·胞外表达质粒pPIC9K-glu的构建 | 第24-27页 |
| ·转化毕赤酵母GS115 | 第27-29页 |
| ·毕赤酵母转化子的诱导 | 第29页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳 | 第29-30页 |
| ·重组β-1，3-葡聚糖酶（GLU）酶学特性初步分析 | 第30-31页 |
| ·重组GLU抗病原特性的初步探索 | 第31-32页 |
| 第3章 β-1，3-葡聚糖酶基因（glu）克隆 | 第32-38页 |
| ·球毛壳菌β-1，3-葡聚糖酶基因（glu）克隆 | 第32-35页 |
| ·BlastX相似性搜索和信号肽预测 | 第32-34页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第34-35页 |
| ·cDNA的获得 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-37页 |
| ·本章小结 | 第37-38页 |
| 第4章 重组葡聚糖酶在毕赤酵母中的表达 | 第38-46页 |
| ·重组质粒pPIC9K-glu的构建 | 第38-39页 |
| ·双酶切和连接 | 第38-39页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第39页 |
| ·重组质粒转化毕赤酵母GS115 | 第39-42页 |
| ·电转化 | 第39-40页 |
| ·甲醇利用型转化子的筛选 | 第40-41页 |
| ·PCR扩增筛选阳性转化子 | 第41-42页 |
| ·GS115 转化子细胞的诱导 | 第42-43页 |
| ·培养与诱导 | 第42-43页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳分析 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| ·转化毕赤酵母GS115 方法的选择 | 第43页 |
| ·转化前线性化酶的选择和线性化条件 | 第43-44页 |
| ·制备酵母基因组DNA PCR模板方法的选择 | 第44页 |
| ·毕赤酵母转化子诱导表达条件 | 第44-45页 |
| ·本章小结 | 第45-46页 |
| 第5章 重组葡聚糖酶酶学及抗菌特性 | 第46-50页 |
| ·葡萄糖标准曲线测定 | 第46页 |
| ·重组葡聚糖酶部分酶学特性的研究 | 第46-47页 |
| ·培养时间对重组GLU酶活性的影响 | 第46-47页 |
| ·温度对重组GLU酶活性的影响 | 第47页 |
| ·重组GLU抗植物病原真菌的初步探索 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| ·葡聚糖酶酶活性测定方法的选择 | 第48页 |
| ·重组GLU反应条件初步探索 | 第48页 |
| ·提高重组GLU酶活性的进一步讨论 | 第48-49页 |
| ·本章小结 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第56-58页 |
| 致谢 | 第58页 |