| 摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 前言 | 第16-19页 |
| 第一部分 左归丸冻干粉的制备与质量控制 | 第19-23页 |
| 1 材料 | 第19页 |
| 1.1 药物 | 第19页 |
| 1.2 试剂和仪器 | 第19页 |
| 2 方法 | 第19-23页 |
| 2.1 ZGW冻干粉的制备 | 第19-20页 |
| 2.2 标准品和样本的制备 | 第20页 |
| 2.3 ZGW超高效液相分析方法的建立 | 第20-21页 |
| 2.4 ZGW指纹质谱分析方法的建立 | 第21页 |
| 2.5 结果 | 第21-23页 |
| 2.5.1 ZGW UHPLC指纹图谱和成分对比及定量分析 | 第21-23页 |
| 第二部分 体内实验 | 第23-42页 |
| 1 材料 | 第23-24页 |
| 1.1 动物 | 第23页 |
| 1.2 试剂 | 第23页 |
| 1.3 仪器 | 第23-24页 |
| 2 方法 | 第24-36页 |
| 2.1 骨质疏松模型的建立 | 第24-25页 |
| 2.1.1 术前准备 | 第24页 |
| 2.1.2 术中操作 | 第24-25页 |
| 2.1.3 术后护理 | 第25页 |
| 2.2 动物分组、给药和取材 | 第25-26页 |
| 2.3 Elisa法检测血清骨转换标记物 | 第26-28页 |
| 2.4 股骨HE染色观察骨病理形态学变化 | 第28-29页 |
| 2.4.1 骨组织脱水 | 第28页 |
| 2.4.2 骨组织包埋与切片 | 第28页 |
| 2.4.3 组织学苏木素-伊红(H-E)染色 | 第28-29页 |
| 2.5 显微断层扫描股骨密度和骨显微结构 | 第29-31页 |
| 2.5.1 骨扫描 | 第29-30页 |
| 2.5.2 重构 | 第30页 |
| 2.5.3 数据预览 | 第30页 |
| 2.5.4 感兴趣区域选择 | 第30-31页 |
| 2.5.5 三维图形的建立 | 第31页 |
| 2.6 生物力学检测股骨强度 | 第31页 |
| 2.7 实时荧光定量PCR(qPCR)检测 | 第31-33页 |
| 2.7.1 组织总RNA的抽提 | 第32-33页 |
| 2.7.2 RNA逆转cDNA | 第33页 |
| 2.7.3 扩增 | 第33页 |
| 2.8 蛋白印迹法(Western blot)分析 | 第33-36页 |
| 2.8.1 Western blot相关试剂的配制 | 第34页 |
| 2.8.2 组织蛋白提取 | 第34页 |
| 2.8.3 BCA法蛋白质浓度的测定 | 第34-35页 |
| 2.8.4 电泳 | 第35-36页 |
| 2.9 统计学分析 | 第36页 |
| 3 结果 | 第36-42页 |
| 3.1 对去卵巢大鼠体重的影响 | 第36页 |
| 3.2 对骨转换吸收标志物的影响 | 第36-37页 |
| 3.3 对骨病理形态学的影响 | 第37页 |
| 3.4 对骨密度和骨显微结构的影响 | 第37-38页 |
| 3.5 对去卵巢大鼠股骨力学的影响 | 第38-39页 |
| 3.6 对Orexin-A,OX1R,OX2R,RANKL和OPG mRNA的影响 | 第39-40页 |
| 3.7 对Orexin-A,OX1R,OX2R,RANKL和OPG蛋白的影响 | 第40-42页 |
| 第三部分 体外实验 | 第42-64页 |
| 1 实验材料 | 第42-43页 |
| 1.1 动物 | 第42页 |
| 1.2 试剂 | 第42-43页 |
| 1.3 仪器 | 第43页 |
| 2 实验方法 | 第43-52页 |
| 2.1 BMSCs的提取和鉴定 | 第43-47页 |
| 2.1.1 BMSCs的分离提取 | 第43-44页 |
| 2.1.2 细胞增殖实验 | 第44页 |
| 2.1.3 细胞成骨诱导染色 | 第44-45页 |
| 2.1.4 细胞成脂诱导染色 | 第45页 |
| 2.1.5 碱性磷酸酶检测细胞中AKP含量 | 第45-46页 |
| 2.1.6 细胞周期检测 | 第46页 |
| 2.1.7 对细胞表面抗体标记物CD 29、CD 90、CD 11b/c和CD 45的检测 | 第46页 |
| 2.1.8 对细胞中BGP、ALP、COLIA1、RUNX和PPARγ的mRNA的检测 | 第46-47页 |
| 2.2 ZGW含药血清对BMSCs向成骨诱导的干预 | 第47-50页 |
| 2.2.1 ZGW含药血清的制备 | 第47页 |
| 2.2.2 ZGW含药血清干预BMSCs的增殖实验 | 第47-48页 |
| 2.2.3 碱性磷酸酶法对细胞AKP检测 | 第48页 |
| 2.2.4 碱性磷酸酶钙钴染色 | 第48页 |
| 2.2.5 qPCR检测BMSCs中OX1R、OX2R、OPG和RANKL等mRNA水平 | 第48-49页 |
| 2.2.6 Western bloting检测BMSCs中RUNX2、RANKL和OPG蛋白的水平 | 第49-50页 |
| 2.3 拮抗剂对ZC促进BMSCs增殖分化的影响 | 第50-51页 |
| 2.3.1 OX1R拮抗剂对BMSCs的毒性检测 | 第50页 |
| 2.3.2 OX2R拮抗剂对BMSCs的毒性实验 | 第50页 |
| 2.3.3 OX1R/OX2R双重拮抗剂对BMSCs的毒性实验 | 第50页 |
| 2.3.4 碱性磷酸酶钙钴染色 | 第50-51页 |
| 2.3.5 碱性磷酸酶检测细胞中AKP的含量 | 第51页 |
| 2.3.6 Western blot检测RUNX2、OPG和RANKL蛋白的表达 | 第51页 |
| 2.4 统计学分析 | 第51-52页 |
| 3 结果 | 第52-64页 |
| 3.1 细胞鉴定 | 第52-56页 |
| 3.1.1 对细胞形态观察 | 第52页 |
| 3.1.2 对细胞增殖的影响 | 第52-53页 |
| 3.1.3 对细胞成骨和成脂诱导染色的影响 | 第53-54页 |
| 3.1.4 对AKP含量的影响 | 第54页 |
| 3.1.5 对细胞周期的影响 | 第54页 |
| 3.1.6 对细胞表面抗体标记物CD 29、CD 90、CD 11b/c和CD 45的影响 | 第54-55页 |
| 3.1.7 对细胞中BGP、ALP、COLIA1和PPARγ等mRNA表达的影响 | 第55-56页 |
| 3.2 ZGW含药血清对BMSCs向成骨诱导的影响 | 第56-58页 |
| 3.2.1 对BMSCs增殖的影响 | 第56页 |
| 3.2.2 对细胞中AKP含量的影响 | 第56页 |
| 3.2.3 对碱性磷酸酶钙钴染色的影响 | 第56-57页 |
| 3.2.4 对Orexin-A、OX1R、OX2R、OPG和RANKL等mRNA的影响 | 第57页 |
| 3.2.5 对BMSCs中RUNX2、RANKL和OPG蛋白的影响 | 第57-58页 |
| 3.3 拮抗剂对ZCS促进BMSCs增殖分化的影响 | 第58-64页 |
| 3.3.1 OX1R拮抗剂对BMSCs毒性的影响 | 第58-59页 |
| 3.3.2 OX2R拮抗剂对BMSCs毒性的影响 | 第59页 |
| 3.3.3 OX1R/OX2R双重拮抗剂对BMSCs毒性的影响 | 第59页 |
| 3.3.4 对AKP的影响 | 第59-60页 |
| 3.3.5 对碱性磷酸酶ALP染色的影响 | 第60-61页 |
| 3.3.6 OX1R拮抗剂对ZC干预BMSCs向OB方向诱导的相关蛋白影响 | 第61-62页 |
| 3.3.7 OX2R拮抗剂对ZC干预BMSCs向OB方向诱导的相关蛋白影响 | 第62页 |
| 3.3.8 OX1R/OX2R双重拮抗剂对ZC干预BMSCs向成骨方向诱导的相关蛋白影响 | 第62-64页 |
| 第四部分 讨论 | 第64-69页 |
| 1 肾-精-髓-脑-骨的相互关系 | 第64-65页 |
| 2 髓海亏虚与食欲素缺乏 | 第65页 |
| 3 左归丸补肾充脑壮骨的分子机制 | 第65-69页 |
| 第五部分 结语 | 第69-72页 |
| 1 结论 | 第69页 |
| 2 本研究的创新之处 | 第69-70页 |
| 3 问题与展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 附录1 中英文缩略词对照表 | 第78-80页 |
| 附录2 个人简介 | 第80-81页 |
| 附录3 攻读硕士博士学位期间取得的学术成果 | 第81-82页 |
| 附录4 左归丸防治绝经后骨质疏松症的相关实验研究述评 | 第82-90页 |
| 参考文献 | 第87-90页 |
