| 摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第13-24页 |
| 1.1 水稻虫害及其防治 | 第13-15页 |
| 1.1.1 水稻种植及其主要虫害 | 第13-14页 |
| 1.1.2 水稻害虫的防治策略 | 第14-15页 |
| 1.2 苏云金芽胞杆菌 | 第15-19页 |
| 1.2.1 苏云金芽胞杆菌及Bt杀虫蛋白 | 第15-17页 |
| 1.2.2 Bt与半翅目昆虫 | 第17-19页 |
| 1.3 内生菌 | 第19-23页 |
| 1.3.1 内生菌的作用 | 第19-20页 |
| 1.3.2 植物与微生物之间的相互作用 | 第20页 |
| 1.3.3 菌株内生方式 | 第20页 |
| 1.3.4 植食性昆虫-微生物的关系 | 第20-21页 |
| 1.3.5 植食性昆虫-植物的相互适应性 | 第21-23页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 第二章 IPPBIOTSUC1012菌株在水稻中内生的分析 | 第24-43页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第24-26页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第24-25页 |
| 2.1.2 供试虫源 | 第25页 |
| 2.1.3 人工饲料 | 第25页 |
| 2.1.4 酶与生化试剂 | 第25页 |
| 2.1.5 培养基与抗生素 | 第25页 |
| 2.1.6 常用溶液与缓冲液 | 第25-26页 |
| 2.1.7 主要仪器设备 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-32页 |
| 2.2.1 gfp片段的扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.2 目的产物的纯化与连接转化 | 第27-28页 |
| 2.2.3 阳性克隆的鉴定 | 第28页 |
| 2.2.4 大肠杆菌质粒的提取 | 第28页 |
| 2.2.5 ET感受态制备和转化 | 第28页 |
| 2.2.6 IPPBIOTSUC1012菌株感受态的制备与转化 | 第28-29页 |
| 2.2.7 激光共聚焦观察水稻内生菌 | 第29页 |
| 2.2.8 水稻中内生菌的分离与鉴定 | 第29页 |
| 2.2.9 IPPBIOTSUC1012菌株晶体和芽胞大小测量 | 第29-30页 |
| 2.2.10 生物活性测定体系的建立 | 第30页 |
| 2.2.11 荧光纳米微球试验 | 第30-31页 |
| 2.2.12 芽胞和晶体混合物的制备 | 第31页 |
| 2.2.13 IPPBIOTSUC1012菌株溶解性的测试 | 第31页 |
| 2.2.14 IPPBIOTSUC1012菌株水溶液制备和活性测试 | 第31页 |
| 2.2.15 灰飞虱取食水稻的情况调查 | 第31-32页 |
| 2.3 实验结果 | 第32-41页 |
| 2.3.1 gfp片段的扩增与载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.3.2 GFP标记菌株的形态学观察 | 第33页 |
| 2.3.3 激光共聚焦检测水稻中内生菌的分布 | 第33-35页 |
| 2.3.4 水稻中内生菌的分离与鉴定 | 第35页 |
| 2.3.5 IPPBIOTSUC1012菌株晶体和芽胞大小的测量 | 第35-36页 |
| 2.3.6 荧光纳米微球实验 | 第36-37页 |
| 2.3.7 晶胞混合物的生测 | 第37页 |
| 2.3.8 IPPBIOTSUC1012菌株溶解性实验 | 第37-39页 |
| 2.3.9 IPPBIOTSUC1012菌株水溶液生测实验 | 第39页 |
| 2.3.10 内生菌有对灰飞虱种群差异的影响 | 第39-41页 |
| 2.4 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 对灰飞虱有活性的三种蛋白的作用机制初探 | 第43-56页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第43-45页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第43-44页 |
| 3.1.2 供试虫源 | 第44页 |
| 3.1.3 培养基和抗生素 | 第44页 |
| 3.1.4 常用溶液和缓冲液 | 第44页 |
| 3.1.5 主要仪器设备 | 第44页 |
| 3.1.6 引物设计与载体构建 | 第44-45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-47页 |
| 3.2.1 目的片段的PCR扩增 | 第45页 |
| 3.2.2 PCR产物回收 | 第45页 |
| 3.2.3 连接转化 | 第45页 |
| 3.2.4 ET感受态制备和转化 | 第45-46页 |
| 3.2.5 HD73无晶体突变株感受态制备与转化 | 第46页 |
| 3.2.6 阳性克隆的PCR鉴定 | 第46页 |
| 3.2.7 大肠杆菌质粒提取 | 第46页 |
| 3.2.8 Westernblot杂交分析 | 第46页 |
| 3.2.9 Cry64Ba-Cry64Ca蛋白的提取及纯化 | 第46页 |
| 3.2.10 Cry64Ba-Cry64Ca蛋白的生测 | 第46页 |
| 3.2.11 Cry78Aa蛋白与灰飞虱BBMV的饱和结合 | 第46-47页 |
| 3.2.12 Cry78Aa蛋白与Cry64Ba-Cry64Ca蛋白的同源和异源竞争 | 第47页 |
| 3.3 实验结果 | 第47-52页 |
| 3.3.1 cry64Ba和cry64Ca目的片段的扩增 | 第47-48页 |
| 3.3.2 Cry64Ba和Cry64Ca蛋白的单独表达 | 第48-49页 |
| 3.3.3 Cry64单独表达蛋白的生测 | 第49-50页 |
| 3.3.4 Cry78Aa1蛋白与灰飞虱BBMV的饱和结合 | 第50-51页 |
| 3.3.5 Cry78Aa蛋白与Cry64Ba-Cry64Ca蛋白的同源和异源竞争 | 第51-52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-56页 |
| 全文总结 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-69页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第69页 |
