| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 缩略语简表 | 第15-17页 |
| 第一章 前言 | 第17-31页 |
| 1.1 大宗发酵 | 第17-19页 |
| 1.2 典型大宗发酵产品的生物合成基因改造 | 第19-22页 |
| 1.2.1 氨基酸 | 第19-20页 |
| 1.2.2 生物燃料 | 第20页 |
| 1.2.3 有机酸 | 第20-21页 |
| 1.2.4 维生素 | 第21-22页 |
| 1.3 维生素C发酵 | 第22-26页 |
| 1.3.1 添加外源物质 | 第23页 |
| 1.3.2 分子生物学研究 | 第23-24页 |
| 1.3.3 组学研究 | 第24-26页 |
| 1.4 启动子研究 | 第26-28页 |
| 1.4.1 启动子的结构 | 第26页 |
| 1.4.2 启动子工程策略 | 第26-28页 |
| 1.5 代谢途径的研究 | 第28-30页 |
| 1.5.1 经典代谢途径 | 第28-29页 |
| 1.5.2 磷酸转酮酶途径 | 第29-30页 |
| 1.6 立题依据 | 第30-31页 |
| 第二章 酮古龙酸菌基因组分析 | 第31-60页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第31页 |
| 2.1.2 培养基及试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-35页 |
| 2.2.1 发酵检测 | 第32-33页 |
| 2.2.2 全基因组测序 | 第33-34页 |
| 2.2.3 基因组注释 | 第34-35页 |
| 2.2.4 代谢途径分析 | 第35页 |
| 2.3 实验结果 | 第35-57页 |
| 2.3.1 K.vulgare SPU_B805基因组分析 | 第35-41页 |
| 2.3.2 K.robustum SPU_B003基因组分析 | 第41-46页 |
| 2.3.3 K.vulgare种内比较基因组分析 | 第46-53页 |
| 2.3.4 Ketogulonigenium种间比较基因组分析 | 第53-57页 |
| 2.4 小结 | 第57-59页 |
| 2.5 讨论 | 第59-60页 |
| 第三章 K.robustum SPU_B003启动子的研究 | 第60-83页 |
| 3.1 实验材料 | 第60-63页 |
| 3.1.1 菌株及质粒 | 第60-61页 |
| 3.1.2 引物 | 第61-62页 |
| 3.1.3 培养基及试剂 | 第62-63页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第63页 |
| 3.2 实验方法 | 第63-68页 |
| 3.2.1 启动子预测 | 第63页 |
| 3.2.2 启动子活性检测质粒构建流程 | 第63-64页 |
| 3.2.3 基因操作 | 第64-67页 |
| 3.2.4 荧光检测 | 第67-68页 |
| 3.3 实验结果 | 第68-81页 |
| 3.3.1 启动子预测结果 | 第68-72页 |
| 3.3.2 含启动子的质粒构建结果 | 第72-75页 |
| 3.3.3 启动子活性结果 | 第75-81页 |
| 3.4 小结 | 第81页 |
| 3.5 讨论 | 第81-83页 |
| 第四章 XFP-PTA糖代谢途径在酮古龙酸菌中的构建 | 第83-117页 |
| 4.1 实验材料 | 第83-87页 |
| 4.1.1 菌株及质粒 | 第83-84页 |
| 4.1.2 引物 | 第84-86页 |
| 4.1.3 培养基及试剂 | 第86-87页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第87页 |
| 4.2 实验方法 | 第87-97页 |
| 4.2.1 重组质粒构建流程 | 第88-90页 |
| 4.2.2 外源基因的诱导表达 | 第90页 |
| 4.2.3 SDS-PAGE检测蛋白表达 | 第90-91页 |
| 4.2.4 蛋白纯化与透析 | 第91-92页 |
| 4.2.5 蛋白含量检测 | 第92-93页 |
| 4.2.6 乙酰磷酸标准曲线绘制 | 第93页 |
| 4.2.7 磷酸转酮酶酶活检测 | 第93页 |
| 4.2.8 磷酸转乙酰酶酶活检测 | 第93-94页 |
| 4.2.9 乙酰辅酶A含量检测 | 第94页 |
| 4.2.10 RNA提取及完整性检测 | 第94-95页 |
| 4.2.11 cDNA的合成 | 第95-96页 |
| 4.2.12 RT-qPCR | 第96-97页 |
| 4.3 实验结果 | 第97-114页 |
| 4.3.1 xfp体外表达 | 第98-101页 |
| 4.3.2 pta体外表达 | 第101-103页 |
| 4.3.3 密码子的优化 | 第103-104页 |
| 4.3.4 XFP-PTA代谢途径构建 | 第104-106页 |
| 4.3.5 XFP体内活性检测 | 第106-107页 |
| 4.3.6 PTA体内活性检测 | 第107-109页 |
| 4.3.7 乙酰辅酶A含量检测 | 第109页 |
| 4.3.8 重组菌的生长曲线 | 第109-110页 |
| 4.3.9 重组菌的2-酮基-L-古龙酸含量检测 | 第110-113页 |
| 4.3.10 重组菌部分基因转录水平检测 | 第113-114页 |
| 4.4 小结 | 第114-115页 |
| 4.5 讨论 | 第115-117页 |
| 全文总结 | 第117-120页 |
| 全文讨论 | 第120-123页 |
| 创新点 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-134页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第134-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
| 附录 | 第136-168页 |
