摘要 | 第3-4页 |
abstract | 第4页 |
第1章 引言 | 第8-20页 |
1.1 黄病毒简介 | 第8-12页 |
1.1.1 黄病毒科简介 | 第8-9页 |
1.1.2 黄病毒属简介 | 第9-11页 |
1.1.3 黄病毒生活周期 | 第11-12页 |
1.2 寨卡病毒简介 | 第12-16页 |
1.2.1 寨卡病毒传播历史 | 第12-13页 |
1.2.2 寨卡病毒基因组 | 第13-15页 |
1.2.3 寨卡病毒临床症状 | 第15-16页 |
1.3 黄病毒衣壳蛋白简介 | 第16-19页 |
1.3.1 黄病毒衣壳蛋白功能研究 | 第16-17页 |
1.3.2 黄病毒衣壳蛋白结构研究 | 第17-19页 |
1.4 项目研究的意义及目的 | 第19-20页 |
第2章 实验原理 | 第20-38页 |
2.1 分子克隆原理 | 第20-24页 |
2.1.1 PCR技术 | 第20-21页 |
2.1.2 Overlap-PCR | 第21-22页 |
2.1.3 点突变技术 | 第22-24页 |
2.1.5 体外重组克隆筛选 | 第24页 |
2.2 凝胶电泳技术 | 第24-25页 |
2.2.1 琼脂糖凝胶电泳 | 第24页 |
2.2.2 SDS-PAGE | 第24-25页 |
2.2.3 Native-PAGE | 第25页 |
2.3 重组蛋白体外表达 | 第25-28页 |
2.3.1 重组蛋白体外表达系统 | 第25-26页 |
2.3.2 克隆载体及宿主选择 | 第26-27页 |
2.3.3 重组蛋白体外表达优化方法 | 第27-28页 |
2.4 蛋白纯化 | 第28-32页 |
2.4.1 亲和层析 | 第29-31页 |
2.4.2 离子交换层析 | 第31-32页 |
2.4.3 凝胶过滤层析 | 第32页 |
2.5 蛋白结晶学 | 第32-35页 |
2.5.1 结构生物学研究手段 | 第33-34页 |
2.5.2 蛋白晶体生长 | 第34-35页 |
2.5.3 晶体数据收集 | 第35页 |
2.6 蛋白-核酸相互作用研究 | 第35-38页 |
第3章 实验材料与方法 | 第38-50页 |
3.1 实验材料 | 第38-40页 |
3.1.1 ZIKV C蛋白基因序列 | 第38页 |
3.1.2 ZIKV C蛋白表达载体及宿主菌 | 第38页 |
3.1.3 主要实验试剂 | 第38-40页 |
3.2 主要试剂配置方法 | 第40-43页 |
3.3 实验方法 | 第43-46页 |
3.3.1 ZIKV C蛋白基因序列分析 | 第43页 |
3.3.2 ZIKV C蛋白理化性质分析 | 第43页 |
3.3.3 ZIKV C蛋白克隆构建 | 第43-44页 |
3.3.4 ZIKV C蛋白表达 | 第44页 |
3.3.5 蛋白纯化 | 第44-45页 |
3.3.6 蛋白结晶 | 第45-46页 |
3.3.7 晶体优化 | 第46页 |
3.4 EMSA实验方法 | 第46-48页 |
3.5 实验主要仪器 | 第48-50页 |
第4章 实验结果及结果分析 | 第50-78页 |
4.1 ZIKV C蛋白性质分析 | 第50-52页 |
4.1.1 大肠杆菌稀有密码子分析 | 第50-51页 |
4.1.2 ZIKV C蛋白二级结构预测 | 第51-52页 |
4.1.3 ZIKV C蛋白参数分析 | 第52页 |
4.2 ZIKV C蛋白克隆构建 | 第52-54页 |
4.2.1 ZIKV C蛋白PCR实验结果 | 第52-53页 |
4.2.2 ZIKV C蛋白重组质粒测序分析结果 | 第53-54页 |
4.3 ZIKV C蛋白表达纯化结果 | 第54-58页 |
4.3.1 ZIKV C蛋白试表达结果 | 第54-56页 |
4.3.2 ZIKV C蛋白扩大培养及初级纯化结果 | 第56-57页 |
4.3.3 ZIKV C蛋白分子筛结果 | 第57-58页 |
4.4 ZIKV C蛋白晶体生长与优化 | 第58-61页 |
4.4.1 ZIKV C蛋白晶体生长 | 第58-61页 |
4.4.2 ZIKV C蛋白晶体优化 | 第61页 |
4.5 ZIKV C蛋白晶体数据收集与数据处理 | 第61-62页 |
4.6 结构解析 | 第62-72页 |
4.6.1 ZIKV C蛋白晶体结构 | 第63-66页 |
4.6.2 ZIKV C蛋白结构分析 | 第66-70页 |
4.6.3 ZIKV C蛋白表面电荷分析 | 第70-72页 |
4.7 ZIKV C蛋白功能分析 | 第72-78页 |
第5章 结论与展望 | 第78-80页 |
参考文献 | 第80-88页 |
附录 | 第88-92页 |
发表论文 | 第92-94页 |
致谢 | 第94页 |