| 摘要 | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-11页 |
| 1.1 菊科植物的研究进展 | 第8-10页 |
| 1.1.1 菊花育种方法 | 第8-9页 |
| 1.1.2 菊花转基因研究 | 第9-10页 |
| 1.2 贡菊的药用价值研究 | 第10页 |
| 1.3 几丁质酶及其研究进展 | 第10-11页 |
| 1.3.1 几丁质酶的酶学特性及分类 | 第10-11页 |
| 1.3.2 几丁质酶的生物学作用 | 第11页 |
| 2 引言 | 第11-12页 |
| 3 材料与方法 | 第12-30页 |
| 3.1 菊花叶片总RNA提取及cDNA第一链的合成 | 第12-14页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第12页 |
| 3.1.2 仪器和试剂 | 第12页 |
| 3.1.3 试验方法 | 第12-13页 |
| 3.1.3.1 菊花总RNA提取 | 第12-13页 |
| 3.1.3.2 菊花总RNA完整性检测 | 第13页 |
| 3.1.4 cDNA第一条链的合成 | 第13-14页 |
| 3.2 菊花ChCHI基因片段的克隆 | 第14-18页 |
| 3.2.1 菌株、载体与引物 | 第14页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第14页 |
| 3.2.3 仪器与设备 | 第14-15页 |
| 3.2.4 试验方法 | 第15-18页 |
| 3.2.4.1 菊花ChCHI基因片段的克隆 | 第15页 |
| 3.2.4.2 目的片段琼脂糖凝胶回收 | 第15-16页 |
| 3.2.4.3 大肠杆菌的培养 | 第16页 |
| 3.2.4.4 CaCl_法制备E.coli DH5α感受态细胞 | 第16-17页 |
| 3.2.4.5 菊花ChCHI基因目的片段与p GEM-T Easy Vector克隆载体的连接 | 第17页 |
| 3.2.4.6 大肠杆菌的转化及检测 | 第17页 |
| 3.2.4.7 菌液阳性克隆鉴定 | 第17-18页 |
| 3.3 菊花ChCHI基因全长序列的获得及ORF（开放阅读框）的扩增 | 第18-24页 |
| 3.3.1 菌株、质粒与引物 | 第18-19页 |
| 3.3.2 主要试剂 | 第19页 |
| 3.3.3 仪器与设备 | 第19页 |
| 3.3.4 试验方法 | 第19-24页 |
| 3.3.4.1 菊花ChCHI基因 3′RACE扩增 | 第19-21页 |
| 3.3.4.2 菊花ChCHI基因 5′RACE扩增 | 第21-23页 |
| 3.3.4.3 菊花ChCHI基因全长序列的拼接及ORF的扩增 | 第23-24页 |
| 3.4 菊花ChCHI基因植物表达载体p CAMBIA1300-ChCHI的构建 | 第24-27页 |
| 3.4.1 菌株与质粒 | 第24页 |
| 3.4.2 试剂 | 第24-25页 |
| 3.4.3 试验方法 | 第25-27页 |
| 3.4.3.1 菌液的扩摇 | 第25页 |
| 3.4.3.2 pGEM-ChCHI质粒提取 | 第25页 |
| 3.4.3.3 pGEM-ChCHI质粒的双酶切 | 第25-26页 |
| 3.4.3.4 pCAMBIA1300质粒的双酶切 | 第26页 |
| 3.4.3.5 pCAMBIA1300-ChCHI植物表达载体的构建与鉴定 | 第26-27页 |
| 3.5 菊花ChCHI基因的表达模式分析 | 第27-29页 |
| 3.5.1 试验材料 | 第27页 |
| 3.5.2 仪器和试剂 | 第27页 |
| 3.5.3 试验方法 | 第27-29页 |
| 3.5.3.1 RNA提取及完整性检测 | 第27页 |
| 3.5.3.2 cDNA第一链的合成 | 第27-28页 |
| 3.5.3.3 实时荧光定量PCR | 第28-29页 |
| 3.6 菊花遗传转化体系的初探 | 第29-30页 |
| 3.6.1 试验材料 | 第29页 |
| 3.6.1.1 菌株与转化材料 | 第29页 |
| 3.6.1.2 试剂 | 第29页 |
| 3.6.2 试验方法 | 第29-30页 |
| 3.6.2.1 提取质粒 | 第29-30页 |
| 3.6.2.2 质粒DNA转化农杆菌 | 第30页 |
| 3.6.2.3 转化贡菊 | 第30页 |
| 4 结果与分析 | 第30-43页 |
| 4.1 总RNA的提取与检测结果 | 第30-31页 |
| 4.1.1 总RNA的电泳结果分析 | 第30-31页 |
| 4.2 菊花ChCHI基因片段的克隆及全长序列的获得 | 第31-39页 |
| 4.2.1 菊花ChCHI基因片段的克隆 | 第31页 |
| 4.2.2 菊花ChCHI基因 3′ RACE扩增 | 第31-32页 |
| 4.2.3 菊花ChCHI基因 5′ RACE扩增 | 第32页 |
| 4.2.4 菊花ChCHI基因cDNA全长的拼接及开放阅读框（ORF）的扩增 | 第32-34页 |
| 4.2.5 菊花ChCHI基因生物信息学分析 | 第34-39页 |
| 4.2.5.1 菊花ChCHI基因蛋白质理化性质的预测与分析 | 第34-38页 |
| 4.2.5.2 不同植物ChCHI基因氨基酸多重序列比对分析和系统进化分析 | 第38-39页 |
| 4.3 菊花ChCHI基因植物表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 4.4 菊花ChCHI基因表达分析 | 第40-42页 |
| 4.4.1 RNA提取及完整性检测 | 第40-41页 |
| 4.4.2 菊花ChCHI基因表达结果分析 | 第41-42页 |
| 4.5 菊花ChCHI基因的遗传转化 | 第42-43页 |
| 5 结论与讨论 | 第43-46页 |
| 5.1 菊花ChCHI基因的克隆 | 第43页 |
| 5.2 菊花ChCHI基因植物表达载体的构建 | 第43-44页 |
| 5.3 菊花ChCHI基因表达分析 | 第44页 |
| 5.4 菊花ChCHI基因的遗传转化 | 第44页 |
| 5.5 展望 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 英文摘要 | 第51-52页 |
