| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第1章 绪论 | 第18-40页 |
| 1.1 聚γ-谷氨酸(γ-PGA) | 第18-26页 |
| 1.1.1 γ-PGA简介 | 第18页 |
| 1.1.2 γ-PGA的性质及应用 | 第18-19页 |
| 1.1.3 γ-PGA的合成及调控 | 第19-22页 |
| 1.1.4 γ-PGA高产菌株的代谢工程育种 | 第22-26页 |
| 1.2 氮代谢全局调控因子TnrA | 第26-27页 |
| 1.2.1 转录因子TnrA简介 | 第26-27页 |
| 1.2.2 芽胞杆菌中转录因子TnrA的调控网络及机制 | 第27页 |
| 1.3 厌氧转录因子Fnr | 第27-29页 |
| 1.3.1 转录因子Fnr简介 | 第27-28页 |
| 1.3.2 转录因子Fnr调控网络 | 第28-29页 |
| 1.4 辅酶工程研究进展 | 第29-33页 |
| 1.4.1 辅酶代谢简介 | 第29页 |
| 1.4.2 目的产物高产的辅酶工程育种 | 第29-33页 |
| 1.5 能量代谢工程研究进展 | 第33-38页 |
| 1.5.1 ATP简介及合成调控 | 第33-34页 |
| 1.5.2 目的产物高产的能量代谢工程育种 | 第34-38页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第38-40页 |
| 第2章 地衣芽胞杆菌转录因子TnrA调控聚γ-谷氨酸合成的代谢机制 | 第40-72页 |
| 2.1 前言 | 第40-41页 |
| 2.2 材料与方法 | 第41-54页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第41-42页 |
| 2.2.2 培养基和抗生素 | 第42-43页 |
| 2.2.3 工具酶和试剂 | 第43-44页 |
| 2.2.4 引物列表 | 第44-45页 |
| 2.2.5 抽提液和缓冲液 | 第45-46页 |
| 2.2.6 主要仪器设备 | 第46-47页 |
| 2.2.7 核酸水平实验 | 第47-49页 |
| 2.2.8 重组载体的构建 | 第49-51页 |
| 2.2.9 地衣芽胞杆菌中的基因敲除 | 第51页 |
| 2.2.10 地衣芽胞杆菌摇瓶发酵条件 | 第51页 |
| 2.2.11 生物量的检测 | 第51-52页 |
| 2.2.12 葡萄糖浓度的检测 | 第52页 |
| 2.2.13 聚γ-谷氨酸浓度测定 | 第52页 |
| 2.2.14 纳豆激酶酶活测定 | 第52页 |
| 2.2.15 基因转录水平分析 | 第52-53页 |
| 2.2.16 诱导蛋白的表达与纯化 | 第53页 |
| 2.2.17 DNA和蛋白浓度的测定 | 第53页 |
| 2.2.18 凝胶阻滞实验(EMSA) | 第53-54页 |
| 2.2.19 数据处理 | 第54页 |
| 2.3 结果 | 第54-69页 |
| 2.3.1 不同TnrA表达水平地衣芽胞杆菌工程菌株的构建 | 第54-57页 |
| 2.3.2 转录因子基因tnrA缺失/强化对氮代谢的影响 | 第57-60页 |
| 2.3.3 转录因子基因tnrA缺失/强化对γ-PGA合成的影响 | 第60-63页 |
| 2.3.4 TnrA调控γ-PGA合成酶PgsBCAA的代谢机制解析 | 第63-68页 |
| 2.3.5 芽胞杆菌中转录因子TnrA调控γ-PGA合成酶的普适性研究 | 第68-69页 |
| 2.4 讨论与展望 | 第69-70页 |
| 2.4.1 讨论 | 第69-70页 |
| 2.4.2 展望 | 第70页 |
| 2.5 小结 | 第70-72页 |
| 第3章 地衣芽胞杆菌转录因子Fnr调控聚γ-谷氨酸的代谢机制 | 第72-88页 |
| 3.1 前言 | 第72-73页 |
| 3.2 材料与方法 | 第73-76页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第73页 |
| 3.2.2 培养基和实验所用抗生素浓度 | 第73页 |
| 3.2.3 工具酶和试剂 | 第73页 |
| 3.2.4 引物列表 | 第73-74页 |
| 3.2.5 抽提液和缓冲液 | 第74页 |
| 3.2.6 主要仪器设备 | 第74页 |
| 3.2.7 核酸水平实验 | 第74-75页 |
| 3.2.8 重组载体的构建 | 第75页 |
| 3.2.9 地衣芽胞杆菌基因敲除 | 第75页 |
| 3.2.10 地衣芽胞杆菌摇瓶发酵条件 | 第75页 |
| 3.2.11 生物量的检测 | 第75页 |
| 3.2.12 葡萄糖浓度的检测 | 第75页 |
| 3.2.13 聚γ-谷氨酸浓度测定 | 第75页 |
| 3.2.14 基因转录水平分析 | 第75页 |
| 3.2.15 硝酸盐和亚硝酸浓度的测定 | 第75页 |
| 3.2.16 ATP浓度的测定 | 第75-76页 |
| 3.2.17 乙偶姻和2,3-丁二醇浓度的测定 | 第76页 |
| 3.2.18 数据处理 | 第76页 |
| 3.3 结果 | 第76-85页 |
| 3.3.1 厌氧转录因子基因fnr缺失对γ-PGA合成的影响 | 第76-80页 |
| 3.3.2 厌氧转录因子Fnr强化表达对γ-PGA合成的影响 | 第80-84页 |
| 3.3.3 地衣芽胞杆菌WX/pHY-fnr和WX/pHY300的发酵过程曲线 | 第84-85页 |
| 3.4 讨论与展望 | 第85-86页 |
| 3.4.1 讨论 | 第85-86页 |
| 3.4.2 展望 | 第86页 |
| 3.5 小结 | 第86-88页 |
| 第4章 辅酶工程促地衣芽胞杆菌WX-02高产聚γ-谷氨酸的代谢机制 | 第88-104页 |
| 4.1 前言 | 第88-89页 |
| 4.2 材料与方法 | 第89-93页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第89-90页 |
| 4.2.2 培养基和实验所用抗生素浓度 | 第90页 |
| 4.2.3 工具酶和试剂 | 第90页 |
| 4.2.4 引物列表 | 第90-91页 |
| 4.2.5 抽提液和缓冲液 | 第91页 |
| 4.2.6 主要仪器设备 | 第91页 |
| 4.2.7 核酸水平实验 | 第91页 |
| 4.2.8 重组载体的构建 | 第91页 |
| 4.2.9 地衣芽胞杆菌摇瓶发酵条件 | 第91页 |
| 4.2.10 生物量的检测 | 第91页 |
| 4.2.11 葡萄糖浓度的检测 | 第91-92页 |
| 4.2.12 聚γ-谷氨酸浓度测定 | 第92页 |
| 4.2.13 基因转录水平分析 | 第92页 |
| 4.2.14 乙偶姻和2,3-丁二醇浓度的测定 | 第92页 |
| 4.2.15 Zwf酶活测定 | 第92页 |
| 4.2.16 NADH和NADPH浓度测定 | 第92-93页 |
| 4.2.17 数据处理 | 第93页 |
| 4.3 结果 | 第93-100页 |
| 4.3.1 地衣芽胞杆菌NADPH再生途径强化工程菌株的构建 | 第93-95页 |
| 4.3.2 NADPH再生途径强化对γ-PGA合成的影响 | 第95-97页 |
| 4.3.3 强化表达Zwf对葡萄糖代谢及γ-PGA合成相关基因转录水平的影响 | 第97-98页 |
| 4.3.4 地衣芽胞杆菌WX/pHY300和WX/pHY-zwf中Zwf酶活测定 | 第98-99页 |
| 4.3.5 地衣芽胞杆菌WX/pHY300和WX/pHY-zwf中NADH和NADPH检测 | 第99-100页 |
| 4.4 讨论与展望 | 第100-102页 |
| 4.4.1 讨论 | 第100-101页 |
| 4.4.2 展望 | 第101-102页 |
| 4.5 小结 | 第102-104页 |
| 第5章 能量代谢促地衣芽胞杆菌WX-02高产聚γ-谷氨酸的代谢机制 | 第104-138页 |
| 5.1 前言 | 第104-106页 |
| 5.2 材料与方法 | 第106-111页 |
| 5.2.1 菌株与质粒 | 第106-107页 |
| 5.2.2 培养基和实验所用抗生素浓度 | 第107页 |
| 5.2.3 工具酶和试剂 | 第107-108页 |
| 5.2.4 引物列表 | 第108-109页 |
| 5.2.5 抽提液和缓冲液 | 第109-110页 |
| 5.2.6 主要仪器设备 | 第110页 |
| 5.2.7 核酸水平实验 | 第110页 |
| 5.2.8 重组载体的构建 | 第110页 |
| 5.2.9 地衣芽胞杆菌中基因敲除 | 第110页 |
| 5.2.10 地衣芽胞杆菌基因整合表达菌株的构建 | 第110页 |
| 5.2.11 地衣芽胞杆菌摇瓶发酵条件 | 第110页 |
| 5.2.12 生物量的检测 | 第110页 |
| 5.2.13 葡萄糖浓度的检测 | 第110页 |
| 5.2.14 聚γ-谷氨酸浓度测定 | 第110-111页 |
| 5.2.15 基因转录水平分析 | 第111页 |
| 5.2.16 乙偶姻和2,3-丁二醇浓度的测定 | 第111页 |
| 5.2.17 地衣芽胞杆菌维持代谢系数的测定 | 第111页 |
| 5.2.18 硝酸盐和亚硝酸盐浓度测定 | 第111页 |
| 5.2.19 ATP浓度测定 | 第111页 |
| 5.2.20 数据处理 | 第111页 |
| 5.3 结果 | 第111-133页 |
| 5.3.1 地衣芽胞杆菌中呼吸链途径优化对γ-PGA合成的影响 | 第111-118页 |
| 5.3.2 强化表达透明颤菌血红蛋白对γ-PGA合成的影响 | 第118-120页 |
| 5.3.3 强化ATP合成途径对γ-PGA合成的影响 | 第120-122页 |
| 5.3.4 强化硝酸盐代谢途径对y-PGA合成的影响 | 第122-130页 |
| 5.3.5 组合代谢工程育种促地衣芽胞杆菌高产γ-PGA | 第130-133页 |
| 5.4 讨论与展望 | 第133-136页 |
| 5.4.1 讨论 | 第133-135页 |
| 5.4.2 展望 | 第135-136页 |
| 5.5 小结 | 第136-138页 |
| 第6章 结论 | 第138-140页 |
| 参考文献 | 第140-154页 |
| 附录 | 第154-156页 |
| 攻读博士学位期间的研究成果及获奖 | 第156-160页 |
| 致谢 | 第160-161页 |
