| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 卵菌概述 | 第12-13页 |
| 1.2 疫霉概述 | 第13-14页 |
| 1.2.1 疫霉的分类及研究 | 第13页 |
| 1.2.2 疫霉的生活史 | 第13-14页 |
| 1.3 大豆疫霉发生及其防治 | 第14-18页 |
| 1.3.1 大豆疫病的危害、流行 | 第14-15页 |
| 1.3.2 大豆疫霉的致病机制 | 第15-16页 |
| 1.3.3 大豆疫病的防治 | 第16-18页 |
| 1.3.3.1 以农业、化学防治为代表的传统防治手段 | 第16页 |
| 1.3.3.2 以抗病育种、生物防治为代表的新兴防治手段 | 第16-18页 |
| 1.4 RNA interfering(RNA干扰；RNAi)技术在大豆疫霉研究上的应用.. | 第18-20页 |
| 1.4.1 RNAi现象的发现 | 第18页 |
| 1.4.2 RNAi机制 | 第18-20页 |
| 1.4.3 大豆疫霉基因组学 | 第20页 |
| 1.4.4 RNAi技术在大豆疫霉研究上的应用 | 第20页 |
| 1.5 延胡索酸还原酶研究进展 | 第20-22页 |
| 2 引言 | 第22-23页 |
| 3 材料与方法 | 第23-32页 |
| 3.1 试验材料 | 第23页 |
| 3.1.1 供试菌株和载体 | 第23页 |
| 3.1.2 供试大豆 | 第23页 |
| 3.1.3 培养基及试验试剂配置 | 第23页 |
| 3.1.4 主要试验仪器 | 第23页 |
| 3.1.5 酶、抗生素和化学试剂 | 第23页 |
| 3.2 试验方法 | 第23-32页 |
| 3.2.1 供试方法 | 第23-26页 |
| 3.2.1.1 大豆疫霉基因组DNA的提取(CTAB-SDS法) | 第23-24页 |
| 3.2.1.2 大豆疫霉总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 3.2.1.3 大豆疫霉各个生长时期RNA的提取 | 第25-26页 |
| 3.2.1.4 大豆疫霉DNA反转录为cDNA | 第26页 |
| 3.2.1.5 大肠杆菌感受态的制备DH5a/JM109DH5a(萨姆布鲁克法) | 第26页 |
| 3.2.1.6 PCR产物回收方法 | 第26页 |
| 3.2.1.7 大肠杆菌质粒提取 | 第26页 |
| 3.2.2 大豆疫霉PsFRD生物信息学预测 | 第26-27页 |
| 3.2.2.1 PsFRD蛋白结构域预测 | 第26-27页 |
| 3.2.2.2 PsFRD蛋白基本性质预测 | 第27页 |
| 3.2.2.3 多序列比对及系统发育树构建 | 第27页 |
| 3.2.3 大豆疫霉延胡索酸还原酶(PsFRD)目的片段的扩增 | 第27-28页 |
| 3.2.4 PsFRD各个生活史阶段和侵染阶段的转录的表达分析 | 第28页 |
| 3.2.5 PsFRD-PTOR-GFP(PsFRD与PTOR-GFP载体反向酶连)瞬时沉默表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 3.2.6 PEG介导大豆疫霉原生质体转化 | 第29-30页 |
| 3.2.7 转化子的筛选及qRT-PCR分析PsFRD表达量 | 第30-31页 |
| 3.2.8 PsFRD沉默转化菌株的表型分析 | 第31页 |
| 3.2.9 PsFRD沉默转化菌丝及游动孢子囊生长状况 | 第31页 |
| 3.2.9.1 PsFRD沉默转化子菌丝生长差异 | 第31页 |
| 3.2.9.2 PsFRD沉默转化子菌丝生长差异 | 第31页 |
| 3.2.10 PsFRD沉默转化菌株的致病性分析 | 第31-32页 |
| 4 结果与分析 | 第32-44页 |
| 4.1 PsFRD基因片段扩增及氨基酸序列分析 | 第32-36页 |
| 4.1.1 PsFRD基因片段扩增及保守结构域预测分析 | 第32页 |
| 4.1.2 PsFRD蛋白基本性质 | 第32-34页 |
| 4.1.3 多序列比对及系统发育树构建 | 第34-36页 |
| 4.2 PsFRD各个生活史阶段和侵染阶段的转录的表达分析 | 第36页 |
| 4.3 PTOR-GFP-PsFRD沉默载体的构建及转化子的获得 | 第36-37页 |
| 4.4 PsFRD沉默转化菌株的表型分析 | 第37-39页 |
| 4.5 PsFRD沉默转化菌丝及游动孢子囊生长状况 | 第39-41页 |
| 4.5.1 PsFRD沉默转化子菌丝生长差异 | 第39-40页 |
| 4.5.2 PsFRD沉默转化子游动孢子囊形成差异 | 第40-41页 |
| 4.6 PsFRD沉默转化菌株的致病性分析 | 第41-44页 |
| 5 小结与讨论 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 附录 | 第51-54页 |
| 附录A | 第51-53页 |
| 附录B | 第53-54页 |
| 作者简介 | 第54页 |
