| 摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-19页 |
| 1.1 软骨与骨的形成过程 | 第12页 |
| 1.2 软骨细胞的产生与增殖分化过程 | 第12-15页 |
| 1.2.1 间充质细胞凝聚 | 第13页 |
| 1.2.2 软骨细胞增殖 | 第13-14页 |
| 1.2.3 软骨细胞分化 | 第14-15页 |
| 1.3 ATDC5细胞系 | 第15-17页 |
| 1.3.1 ATDC5细胞系的建立与研究价值 | 第15页 |
| 1.3.2 参与ATDC5细胞增殖分化的因素 | 第15-17页 |
| 1.4 ATDC5细胞在软骨细胞分化中的相关研究 | 第17-18页 |
| 1.5 实验的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-28页 |
| 2.1 实验仪器与试剂 | 第19页 |
| 2.2 主要试剂的配制 | 第19-21页 |
| 2.3 ATDC5细胞培养与处理 | 第21页 |
| 2.3.1 ATDC5细胞复苏 | 第21页 |
| 2.3.2 ATDC5细胞计数 | 第21页 |
| 2.3.3 ATDC5细胞培养 | 第21页 |
| 2.4 CCK8检测细胞活性变化 | 第21-22页 |
| 2.5 ATDC5细胞染色 | 第22页 |
| 2.5.1 蛋白多糖检验：阿利新兰染色 | 第22页 |
| 2.5.2 钙化检测：茜素红-s染色 | 第22页 |
| 2.6 碱性磷酸酶活性检测 | 第22-23页 |
| 2.6.1 标准曲线的绘制 | 第22页 |
| 2.6.2 配液及检测方法 | 第22-23页 |
| 2.7 总RNA的提取与RT-PCR反应 | 第23-25页 |
| 2.7.1 引物的设计与合成 | 第23页 |
| 2.7.2 总RNA提取 | 第23页 |
| 2.7.3 反转录反应 | 第23-24页 |
| 2.7.4 荧光定量PCR反应 | 第24-25页 |
| 2.7.5 PCR产物电泳 | 第25页 |
| 2.8 WesternBlot | 第25-27页 |
| 2.8.1 ATDC5细胞总蛋白提取及蛋白浓度测定 | 第25-26页 |
| 2.8.2 蛋白样品的处理 | 第26页 |
| 2.8.3 Westernblot检测目的蛋白(SDS－PAGE凝胶电泳) | 第26-27页 |
| 2.9 统计分析方法 | 第27-28页 |
| 3 结果 | 第28-47页 |
| 3.1 ATDC5细胞增殖检测结果 | 第28页 |
| 3.2 RNA的完整性检测及DNA验证结果 | 第28-29页 |
| 3.3 基质矿化及蛋白多糖生成的趋势 | 第29-30页 |
| 3.4 ALP活性的检测 | 第30-32页 |
| 3.5 软骨细胞增殖分化各阶段标志性因子的表达趋势 | 第32-47页 |
| 3.5.1 FN1的表达趋势 | 第32-34页 |
| 3.5.2 Sox9的表达趋势 | 第34-36页 |
| 3.5.3 Ⅱ型胶原的表达趋势 | 第36-38页 |
| 3.5.4 蛋白聚糖的表达趋势 | 第38-40页 |
| 3.5.5 Ⅹ型胶原的表达趋势 | 第40-42页 |
| 3.5.6 Runx2的表达趋势 | 第42-44页 |
| 3.5.7 Col1的表达趋势 | 第44-47页 |
| 4 讨论 | 第47-53页 |
| 4.1 软骨细胞静息期标志物Fn1,Sox9的表达情况 | 第47-48页 |
| 4.2 软骨细胞增殖期标志物Col2,Aggrecan的表达情况 | 第48-50页 |
| 4.3 软骨细胞肥大前期标志物Runx2,Col10的表达情况 | 第50-51页 |
| 4.4 软骨细胞肥大期标志物Col1,ALP的表达情况 | 第51-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第65页 |
