| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第12-21页 |
| 一、西藏小型猪在生物医药研究中的应用越来越广泛 | 第12-13页 |
| 二、GH-GHR-IGF信号转导通路在动物生长发育中的作用 | 第13-15页 |
| 三、CRISPR/Cas9技术 | 第15-19页 |
| 1. CRISPR/Cas9技术简介和作用原理 | 第15-17页 |
| 2. CRISPR/Cas9技术的应用 | 第17-19页 |
| 四、本研究的研究目的和研究内容 | 第19-20页 |
| 五、研究意义和创新性 | 第20-21页 |
| 第二章 Cas9 mRNA与sgRNAs的制备 | 第21-34页 |
| 一、材料和方法 | 第21-29页 |
| (一) 材料 | 第21页 |
| (二) 方法 | 第21-29页 |
| 二、结果 | 第29-32页 |
| 1. sgRNA设计 | 第29-30页 |
| 2. sgRNA骨架载体pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin (pGU6)酶切线性化 | 第30页 |
| 3. 构建sgRNA体外转录模板 | 第30-31页 |
| 4. sgRNA的体外转录 | 第31页 |
| 5. Cas9 mRNA的体外转录 | 第31-32页 |
| 三、讨论 | 第32-33页 |
| 1. CRISPR/Cas9基因编辑技术的特点及sgRNA序列的设计 | 第32-33页 |
| 2. 体外转录注意事项 | 第33页 |
| 四、小结 | 第33-34页 |
| 第三章 利用CRISPR/Cas9技术制备IGF1基因敲除小鼠 | 第34-53页 |
| 一、材料和方法 | 第34-46页 |
| (一) 材料 | 第34-35页 |
| (二) 方法 | 第35-46页 |
| 二、结果 | 第46-52页 |
| 1. F0代小鼠的基因型分析 | 第46-47页 |
| 2. F0代小鼠的生长发育 | 第47页 |
| 3. F0小鼠IGF1基因表达检测 | 第47-48页 |
| 4. 各组织脏器的组织学分析 | 第48-51页 |
| 5. 脱靶效应分析 | 第51页 |
| 6. F1代的获得 | 第51-52页 |
| 三、小结与讨论 | 第52-53页 |
| 1. CRISPR/Cas9的编辑结果 | 第52页 |
| 2. IGF1敲除导致生长迟缓 | 第52页 |
| 3. 脱靶效应 | 第52-53页 |
| 第四章 利用CRISPR/Cas9技术制备GHR基因敲除西藏小型猪 | 第53-70页 |
| 一、材料和方法 | 第54-63页 |
| (一) 材料与试剂 | 第54-56页 |
| (二) 方法 | 第56-63页 |
| 二、结果 | 第63-69页 |
| 1. F0代西藏小型猪的基因型分析 | 第63-64页 |
| 2. F0代西藏小型猪的生长 | 第64-66页 |
| 3. F0代西藏小型猪基因表达检测 | 第66页 |
| 4. F0代西藏小型猪相关激素和血糖检测 | 第66-67页 |
| 5. Cas9-GHR脱靶效应检测 | 第67-69页 |
| 三、小结 | 第69-70页 |
| 全文总结和展望 | 第70-73页 |
| 1. CRISPR/Cas9的编辑结果 | 第70页 |
| 2. GHR/IGF1缺陷导致生长迟缓 | 第70-71页 |
| 3. 脱靶效应 | 第71-72页 |
| 4. 展望 | 第72-73页 |
| References | 第73-76页 |
| 缩略表 | 第76-78页 |
| 攻读硕士期间主要成果 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
