| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-30页 |
| ·金黄色葡萄球菌蛋白A | 第13-18页 |
| ·金黄色葡萄球菌 | 第13页 |
| ·金黄色葡萄球菌蛋白A | 第13-15页 |
| ·蛋白A的免疫学应用 | 第15-16页 |
| ·基于蛋白A为配基吸的附材料及其临床应用 | 第16-18页 |
| ·抗体简介 | 第18-21页 |
| ·抗体分子的特点 | 第18-20页 |
| ·自身抗体与自身免疫性疾病 | 第20-21页 |
| ·抗体与器官移植 | 第21页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第21-25页 |
| ·大肠杆菌表达系统的组成及特点 | 第21-24页 |
| ·pET表达系统简介 | 第24-25页 |
| ·毕赤酵母表达体系 | 第25-29页 |
| ·毕赤酵母表达菌株 | 第25-27页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第27-28页 |
| ·表达外源蛋白培养条件的优化 | 第28-29页 |
| ·论文的研究内容及意义 | 第29-30页 |
| 2 蛋白A大肠杆菌表达菌株的构建和筛选 | 第30-43页 |
| ·引言 | 第30页 |
| ·实验材料 | 第30-32页 |
| ·材料和试剂 | 第30-32页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-35页 |
| ·金黄色葡萄球菌基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·包含蛋白A序列基因的PCR扩增 | 第33页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第33页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第33页 |
| ·PCR产物连接T载体 | 第33页 |
| ·感受态大肠杆菌的制备及质粒的转化 | 第33页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·重组质粒pMD18-T-spa的PCR鉴定 | 第34页 |
| ·目的片段的亚克隆及重组表达载体的构建 | 第34页 |
| ·重组表达载体的双酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白A的诱导表达 | 第35页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第35页 |
| ·重组蛋白A的人IgG亲和活性检测 | 第35页 |
| ·实验结果与讨论 | 第35-41页 |
| ·金黄色葡萄球菌基因组DNA的提取 | 第35-36页 |
| ·包含蛋白A序列基因的PCR扩增 | 第36页 |
| ·重组质粒pMD18-T-spa的构建及PCR鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组质粒pMD18-T-spa插入基因的序列测定及结果分析 | 第37页 |
| ·目的基因的亚克隆及重组表达载体的构建和双酶切鉴定 | 第37-39页 |
| ·重组表达载体插入基因的序列测定及结果分析 | 第39页 |
| ·表达不同结构域组成蛋白A重组菌株的筛选 | 第39-40页 |
| ·E.coli BL21(DE3)-spa4表达重组蛋白A的人IgG亲和活性检测 | 第40-41页 |
| ·小结 | 第41-43页 |
| 3 重组大肠杆菌表达蛋白A培养条件的优化 | 第43-58页 |
| ·引言 | 第43页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·材料和试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-44页 |
| ·重组大肠杆菌的摇瓶培养及蛋白A的诱导表达 | 第43-44页 |
| ·重组大肠杆菌的发酵罐培养及蛋白A的诱导表达 | 第44页 |
| ·BCA法测定蛋白浓度 | 第44页 |
| ·实验结果与讨论 | 第44-57页 |
| ·BCA法测定总蛋白标准曲线 | 第44-45页 |
| ·重组大肠杆菌摇瓶培养表达蛋白A条件的优化 | 第45-53页 |
| ·重组大肠杆菌发酵罐培养表达蛋白A条件的优化 | 第53-57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 4 蛋白A毕赤酵母表达菌株的构建和筛选 | 第58-70页 |
| ·引言 | 第58页 |
| ·实验材料 | 第58-60页 |
| ·材料和试剂 | 第58-60页 |
| ·主要仪器 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-62页 |
| ·重组质粒pMD 18-T Simple-spa的构建 | 第60页 |
| ·重组质粒pMD18-T Simple-spa的PCR鉴定 | 第60页 |
| ·重组质粒pPIC9K-spa的构建 | 第60页 |
| ·重组质粒pPIC9K-spa的PCR和双酶切鉴定 | 第60-61页 |
| ·毕赤酵母GS115感受态细胞的制备 | 第61页 |
| ·重组质粒pPIC9K-spa的线性化 | 第61页 |
| ·重组质粒pPIC9K-spa电击法转化毕赤酵母 | 第61页 |
| ·His~+阳性转化子的Mut~+表型筛选及PCR鉴定 | 第61-62页 |
| ·重组蛋白A的诱导表达 | 第62页 |
| ·实验结果与讨论 | 第62-68页 |
| ·重组质粒pMD 18-T Simple-spa的构建和PCR鉴定 | 第62-63页 |
| ·重组质粒pMD18-T Simple-spa插入基因的序列测定及结果分析 | 第63页 |
| ·重组质粒pPIC9K-spa的构建及其PCR和双酶切鉴定 | 第63-65页 |
| ·重组质粒pPIC9K-spa的线性化 | 第65页 |
| ·电击转化毕赤酵母及菌落PCR鉴定 | 第65-67页 |
| ·Mut~+表型筛选 | 第67页 |
| ·高表达蛋白A重组毕赤酵母菌株的筛选 | 第67-68页 |
| ·毕赤酵母表达重组蛋白A的人IgG亲和活性检测 | 第68页 |
| ·小结 | 第68-70页 |
| 5 重组毕赤酵母表达蛋白A培养条件的优化 | 第70-74页 |
| ·引言 | 第70页 |
| ·实验材料 | 第70页 |
| ·材料和试剂 | 第70页 |
| ·主要仪器 | 第70页 |
| ·实验方法 | 第70页 |
| ·重组毕赤酵母的摇瓶培养及蛋白A的诱导表达 | 第70页 |
| ·实验结果与讨论 | 第70-73页 |
| ·重组毕赤酵母摇瓶培养表达蛋白A条件的优化 | 第70-73页 |
| ·小结 | 第73-74页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
