| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 病原特性 | 第10-11页 |
| 1.1.1 PSV-1的分类地位 | 第10-11页 |
| 1.1.2 PSV-1的形态 | 第11页 |
| 1.1.3 PSV-1培养特性 | 第11页 |
| 1.2 分子病原学研究 | 第11-16页 |
| 1.2.1 PSV-1的基因组结构 | 第11-12页 |
| 1.2.2 PSV-1基因组结构的功能研究 | 第12-15页 |
| 1.2.3 PSV-1的分子流行病学 | 第15-16页 |
| 1.3 致病性研究 | 第16-17页 |
| 1.3.1 PSV-1病理性研究 | 第16-17页 |
| 1.3.2 PSV-1致病机理 | 第17页 |
| 1.4 流行病学 | 第17-19页 |
| 1.4.1 国外PSV-1流行现状 | 第17-18页 |
| 1.4.2 国内PSV-1流行现状 | 第18-19页 |
| 1.5 诊断方法 | 第19-20页 |
| 1.5.1 细胞分离 | 第19页 |
| 1.5.2 免疫组化 | 第19页 |
| 1.5.3 反转录PCR | 第19页 |
| 1.5.4 巢式PCR | 第19-20页 |
| 1.5.5 实时荧光定量PCR | 第20页 |
| 1.5.6 原位杂交技术 | 第20页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第20-22页 |
| 第二章 PSV-VP1蛋白的原核表达及纯化 | 第22-36页 |
| 2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 病毒和菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-29页 |
| 2.2.1 PSVVP1蛋白基因的获取 | 第23-25页 |
| 2.2.2 重组质粒的构建与鉴定 | 第25-27页 |
| 2.2.3 重组蛋白的表达 | 第27-28页 |
| 2.2.4 重组蛋白的纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.5 重组蛋白的抗原性鉴定 | 第29页 |
| 2.3 结果 | 第29-33页 |
| 2.3.1 PSV-1病毒培养 | 第29-30页 |
| 2.3.2 PSVVP1基因的PCR扩增 | 第30页 |
| 2.3.3 重组质粒PET28-VP1的酶切鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.4 重组蛋白的测序结果 | 第31页 |
| 2.3.5 重组蛋白的诱导表达 | 第31-32页 |
| 2.3.6 重组蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| 2.3.7 重组蛋白的抗原性鉴定结果 | 第33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-34页 |
| 2.4.1 目的基因的选择 | 第33页 |
| 2.4.2 表达系统的选择 | 第33-34页 |
| 2.4.3 目的蛋白的纯化 | 第34页 |
| 2.4.4 重组蛋白的抗原性 | 第34页 |
| 2.5 小结 | 第34-36页 |
| 第三章 猪萨佩罗病毒间接免疫荧光方法的建立 | 第36-46页 |
| 3.1 材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 细胞、病毒和血清 | 第36页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第36-37页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第37页 |
| 3.2 方法 | 第37-39页 |
| 3.2.1 间接免疫荧光方法的基本操作步骤 | 第37页 |
| 3.2.2 制备细胞抗原板 | 第37-38页 |
| 3.2.3 间接免疫荧光方法的条件优化 | 第38-39页 |
| 3.2.4 特异性试验 | 第39页 |
| 3.2.5 敏感度试验 | 第39页 |
| 3.2.6 应用建立的IFA方法检测临床血清 | 第39页 |
| 3.3 结果 | 第39-42页 |
| 3.3.1 病毒培养时间的确定 | 第39-40页 |
| 3.3.2 封闭液的选择 | 第40页 |
| 3.3.3 血清孵育条件的确定 | 第40页 |
| 3.3.4 血清和荧光二抗最佳稀释度的确定 | 第40-41页 |
| 3.3.5 特异性试验结果 | 第41页 |
| 3.3.6 敏感度试验结果 | 第41页 |
| 3.3.7 应用建立的IFA方法检测临床血清结果 | 第41-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-43页 |
| 3.4.1 间接免疫荧光方法的选择 | 第42-43页 |
| 3.4.2 减少非特异性干扰 | 第43页 |
| 3.4.3 应用建立的方法检测临床血清 | 第43页 |
| 3.5 小结 | 第43-46页 |
| 第四章 猪萨佩罗病毒间接ELISA方法的建立与初步应用 | 第46-64页 |
| 4.1 材料 | 第46页 |
| 4.1.1 病毒和血清 | 第46页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第46页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第46页 |
| 4.2 方法 | 第46-49页 |
| 4.2.1 重组PSVVP1蛋白的间接ELISA方法的建立与条件优化 | 第46-48页 |
| 4.2.2 特异性试验 | 第48页 |
| 4.2.3 敏感度试验 | 第48-49页 |
| 4.2.4 重复性试验 | 第49页 |
| 4.2.5 阴阳性临界值的确定 | 第49页 |
| 4.2.6 PSV-1间接ELISA检测方法和IFA检测方法检测血清对比 | 第49页 |
| 4.2.7 应用建立的PSV-1间接ELISA检测方法检测临床血清 | 第49页 |
| 4.3 结果 | 第49-61页 |
| 4.3.1 最佳抗原包被浓度与血清稀释倍数的确定 | 第49-50页 |
| 4.3.2 血清样品最佳孵育时间的确定 | 第50-51页 |
| 4.3.3 最佳酶标二抗稀释倍数与作用时间的确定 | 第51-52页 |
| 4.3.4 底物最佳作用时间的确定 | 第52-53页 |
| 4.3.5 重复性试验 | 第53-55页 |
| 4.3.6 阴阳性临界值的确定 | 第55页 |
| 4.3.7 特异性试验 | 第55页 |
| 4.3.8 敏感度试验 | 第55-56页 |
| 4.3.9 PSV-1间接ELISA检测方法和IFA检测方法检测血清对比 | 第56页 |
| 4.3.10 应用建立的PSV-1间接ELISA检测方法检测临床血清结果 | 第56-61页 |
| 4.4 讨论 | 第61-64页 |
| 4.4.1 蛋白包被浓度 | 第61页 |
| 4.4.2 一抗和酶标二抗浓度以及作用时间 | 第61页 |
| 4.4.3 确定临界值 | 第61页 |
| 4.4.4 ELISA方法和IFA方法对比 | 第61页 |
| 4.4.5 五个规模化猪场PSV-1抗体消长规律 | 第61-64页 |
| 全文结论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 缩略词表 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简介 | 第77页 |
