| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-23页 |
| 1.1 乳酸菌简介 | 第13-14页 |
| 1.2 表面展示系统概述 | 第14-15页 |
| 1.2.1 回向锚定系统概述 | 第14-15页 |
| 1.2.2 AcmA蛋白概述 | 第15页 |
| 1.3 绿色荧光蛋白概述 | 第15-16页 |
| 1.3.1 绿色荧光蛋白简介 | 第15-16页 |
| 1.3.2 绿色荧光蛋白的理化性质 | 第16页 |
| 1.3.3 绿色荧光蛋白的应用 | 第16页 |
| 1.4 金属硫蛋白研究进展 | 第16-20页 |
| 1.4.1 金属硫蛋白的结构与理化性质 | 第17-18页 |
| 1.4.2 金属硫蛋白的功能 | 第18页 |
| 1.4.3 金属硫蛋白的应用 | 第18-19页 |
| 1.4.4 金属硫蛋白的制备 | 第19-20页 |
| 1.5 本论文研究背景、主要内容及意义 | 第20-23页 |
| 1.5.1 研究背景及意义 | 第20页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第20-21页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第21-23页 |
| 第二章 回向锚定展示系统的构建及初步研究 | 第23-47页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第23-27页 |
| 2.2.1 菌种引物及载体 | 第23-24页 |
| 2.2.2 主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第25页 |
| 2.2.4 常用培养基及溶液的配制 | 第25-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-41页 |
| 2.3.1 AcmA基因的获得 | 第27-30页 |
| 2.3.2 重叠PCR拼接cA-GFP | 第30-34页 |
| 2.3.3 pMD18-cA-GFP与pET28a载体分别双酶切 | 第34-35页 |
| 2.3.4 cA-GFP与pET28a载体连接 | 第35-36页 |
| 2.3.5 转化 | 第36页 |
| 2.3.6 重组质粒pET28a-cA-GFP的鉴定 | 第36-37页 |
| 2.3.7 转化及阳性克隆的获得 | 第37页 |
| 2.3.8 重组蛋白表达及表达条件优化 | 第37-38页 |
| 2.3.9 蛋白纯化 | 第38-39页 |
| 2.3.10 纯化后蛋白的透析脱盐 | 第39-40页 |
| 2.3.11 绘制cA-GFP荧光曲线 | 第40页 |
| 2.3.12 重组蛋白cA-GFP回向锚定至L. lactis MG1363 | 第40页 |
| 2.3.13 重组蛋白cA-GFP回向锚定至L. lactis MG1363 稳定性检测 | 第40-41页 |
| 2.4 实验结果 | 第41-46页 |
| 2.4.1 AcmA基因扩增结果 | 第41页 |
| 2.4.2 pET28a-cA-GFP重组质粒的构建 | 第41-42页 |
| 2.4.3 重组蛋白表达 | 第42页 |
| 2.4.4 亲和层析纯化结果 | 第42-43页 |
| 2.4.5 cA-GFP荧光标准曲线 | 第43页 |
| 2.4.6 cA-GFP回向锚定至L. lactis MG1363 | 第43-44页 |
| 2.4.7 荧光显微镜下观察L. lactis MG1363 | 第44-45页 |
| 2.4.8 SDS-PAGE检测锚定前后上清液的成分 | 第45页 |
| 2.4.9 锚定至L. lactis蛋白量计算 | 第45-46页 |
| 2.4.10 cA-GFP锚定稳定性检测 | 第46页 |
| 2.5 本章小结 | 第46-47页 |
| 第三章 hMT-I在大肠杆菌中的表达 | 第47-62页 |
| 3.1 引言 | 第47页 |
| 3.2 实验材料 | 第47-49页 |
| 3.2.1 菌种载体及引物 | 第47-48页 |
| 3.2.2 其他试剂与仪器 | 第48-49页 |
| 3.3 实验方法 | 第49-55页 |
| 3.3.1 重叠PCR拼接cA-hMT-I | 第49-52页 |
| 3.3.2 Restriction free (RF)克隆构建pET21a-cA-hMT-I | 第52-53页 |
| 3.3.3 转化 | 第53页 |
| 3.3.4 重组质粒pET21a-cA-hMT-I的鉴定 | 第53-54页 |
| 3.3.5 转化pET21a-cA-hMT-I至E.coli BL21(DE3) | 第54页 |
| 3.3.6 蛋白表达及表达条件优化 | 第54页 |
| 3.3.7 western blot鉴定 | 第54页 |
| 3.3.8 pET21a-cA-hMT-I与分子伴侣质粒在E.coli BL21(DE3)中共表达 | 第54-55页 |
| 3.3.9 pET21a-cA-hMT-I与分子伴侣pTf16 在E.coli BL21(DE3)中共表达条件优化 | 第55页 |
| 3.3.10 重组工程菌吸附重金属 | 第55页 |
| 3.4 实验结果 | 第55-61页 |
| 3.4.1 重叠PCR拼接cA-hMT-I | 第55-56页 |
| 3.4.2 菌落PCR筛选pMD18-cA-hMT-I | 第56页 |
| 3.4.3 RF克隆构建pET21a-cA-hMT-I | 第56-57页 |
| 3.4.4 4种Tag下的pET21a-cA-hMT-I在 37℃下表达 | 第57-58页 |
| 3.4.5 3种Tag下的pET21a-cA-hMT-I在 25℃下表达 | 第58-59页 |
| 3.4.6 pET21a-HcA-hMT-I与5套分子伴侣在E.coli BL21(DE3)中共表达 | 第59-60页 |
| 3.4.7 pET21a-HcA-hMT-I与分子伴侣pTf16 在E.coli BL21(DE3)中共表达条件优化 | 第60-61页 |
| 3.4.8 重组工程菌吸附重金属 | 第61页 |
| 3.5 本章小结 | 第61-62页 |
| 第四章 hMT-I回向锚定至乳酸乳球菌及其功能研究 | 第62-72页 |
| 4.1 引言 | 第62页 |
| 4.2 实验材料 | 第62-63页 |
| 4.2.1 仪器设备 | 第62页 |
| 4.2.2 试剂 | 第62-63页 |
| 4.3 实验方法 | 第63-65页 |
| 4.3.1 cA-hMT-I回向锚定至L.lactis MG1363 SDS-PAGE检测 | 第63页 |
| 4.3.2 cA-hMT-I回向锚定至L.lactis MG1363 ELISA检测 | 第63页 |
| 4.3.3 锚定量测定 | 第63-64页 |
| 4.3.4 cA-hMT-I回向锚定至L.lactis MG1363 稳定性检测 | 第64页 |
| 4.3.5 cA-hMT-I回向锚定至L.lactis MG1363 后对Cd2+的吸附量测定 | 第64页 |
| 4.3.6 cA-hMT-I回向锚定至L.lactis MG1363 后对Pb2+的吸附量测定 | 第64页 |
| 4.3.7 cA-hMT-I回向锚定至L.lactis MG1363 后对Zn2+的吸附量测定 | 第64页 |
| 4.3.8 cA-hMT-I回向锚定至L.lactis MG1363 后对Cu2+的吸附量测定 | 第64-65页 |
| 4.4 实验结果 | 第65-71页 |
| 4.4.1 cA-hMT-I回向锚定至L.lactis MG1363 SDS-PAGE检测 | 第65页 |
| 4.4.2 cA-hMT-I回向锚定至L.lactis MG1363 ELISA检测 | 第65-66页 |
| 4.4.3 锚定量测定 | 第66-67页 |
| 4.4.4 cA-hMT-I回向锚定至L.lactis MG1363 稳定性检测 | 第67-68页 |
| 4.4.5 cA-hMT-I回向锚定至L.lactis MG1363 后对Cd2+的吸附量测定 | 第68页 |
| 4.4.6 cA-hMT-I回向锚定至L.lactis MG1363 后对Pb2+的吸附量测定 | 第68-69页 |
| 4.4.7 cA-hMT-I回向锚定至L.lactis MG1363 后对Zn2+的吸附量测定 | 第69-70页 |
| 4.4.8 cA-hMT-I回向锚定至L.lactis MG1363 后对Cu2+的吸附量测定 | 第70-71页 |
| 4.5 本章小结 | 第71-72页 |
| 结论和展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 附件 | 第83页 |
