| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第1章 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 糖尿病 | 第12页 |
| 1.2 α-葡萄糖苷酶及其抑制剂 | 第12-16页 |
| 1.2.1 α-葡萄糖苷酶 | 第12-13页 |
| 1.2.2 α-葡萄糖苷酶抑制剂 | 第13-16页 |
| 1.3 转氨酶及其应用 | 第16-20页 |
| 1.3.1 转氨酶 | 第16页 |
| 1.3.2 转氨酶的应用 | 第16-20页 |
| 1.4 酶的定向进化 | 第20-21页 |
| 1.4.1 酶的定向进化概述 | 第20页 |
| 1.4.2 定点突变 | 第20-21页 |
| 1.5 生物信息学研究 | 第21-22页 |
| 1.5.1 同源模建 | 第21-22页 |
| 1.5.2 Caver3. | 第22页 |
| 1.6 纤维素酶 | 第22-24页 |
| 1.7 嗜热微生物源纤维素 | 第24-25页 |
| 1.8 立题依据和研究内容 | 第25-26页 |
| 第2章 生物信息学对转氨酶BtrR的结构探究 | 第26-33页 |
| 2.1 实验方法 | 第26-27页 |
| 2.1.1 Valienmine空间结构的研究 | 第26页 |
| 2.1.2 转氨酶BtrR底物的结合方式 | 第26页 |
| 2.1.3 转氨酶BtrR通道识别与分析研究 | 第26-27页 |
| 2.2 实验结果 | 第27-32页 |
| 2.2.1 Valienmine空间结构的研究 | 第27-28页 |
| 2.2.2 转氨酶BtrR底物的结合方式 | 第28-31页 |
| 2.2.3 氨基转移酶BtrR的通道识别与分析研究 | 第31-32页 |
| 2.3 小结 | 第32-33页 |
| 第3章 转氨酶BtrR突变体库的构建与筛选 | 第33-54页 |
| 3.1 实验材料 | 第33-38页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第33页 |
| 3.1.2 培养基 | 第33-35页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第35页 |
| 3.1.4 主要溶液配制 | 第35-37页 |
| 3.1.5 主要仪器 | 第37-38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-46页 |
| 3.2.1 转氨酶BtrR的序列分析 | 第38页 |
| 3.2.2 目的基因的克隆 | 第38-39页 |
| 3.2.3 BtrR重组质粒的构建 | 第39-40页 |
| 3.2.4 感受态细胞的制备和转化 | 第40-41页 |
| 3.2.5 突变体文库的构建与筛选 | 第41-43页 |
| 3.2.6 重组转氨酶BtrR的表达与纯化 | 第43-44页 |
| 3.2.7 蛋白浓度的测定 | 第44-45页 |
| 3.2.8 GDH偶联法测酶活 | 第45-46页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第46-53页 |
| 3.3.1 转氨酶BtrR的序列分析 | 第46页 |
| 3.3.2 目的基因的克隆 | 第46-47页 |
| 3.3.3 转氨酶BtrR重组质粒的构建 | 第47-48页 |
| 3.3.4 饱和突变PCR验证 | 第48-49页 |
| 3.3.5 转氨酶的表达与纯化 | 第49-50页 |
| 3.3.6 酶活力测定 | 第50-51页 |
| 3.3.7 转氨产物valienamine的HPLC分析 | 第51-53页 |
| 3.4 小结 | 第53-54页 |
| 第4章 葡聚糖苷酶AcCel16的酶学性质研究 | 第54-71页 |
| 4.1 实验材料 | 第54-55页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第54页 |
| 4.1.2 培养基 | 第54页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第54-55页 |
| 4.1.4 主要溶液配制 | 第55页 |
| 4.1.5 主要仪器 | 第55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-61页 |
| 4.2.1 葡聚糖苷酶AcCel16的序列分析 | 第55页 |
| 4.2.2 葡聚糖苷酶AcCel16基因的克隆与构建 | 第55-57页 |
| 4.2.3 重组葡聚糖苷酶AcCel16的表达与纯化 | 第57-58页 |
| 4.2.4 蛋白浓度的测定 | 第58页 |
| 4.2.5 葡聚糖苷酶AcCel16酶活力的测定 | 第58-59页 |
| 4.2.6 酶底物特异性测定 | 第59页 |
| 4.2.7 最适pH及酸碱耐受性测定 | 第59-60页 |
| 4.2.8 最适温度及热稳定性测定 | 第60页 |
| 4.2.9 化学试剂及金属离子对酶活力的影响 | 第60页 |
| 4.2.10 葡聚糖苷酶AcCel16的动力学分析 | 第60-61页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第61-70页 |
| 4.3.1 基因序列分析 | 第61-62页 |
| 4.3.2 葡聚糖苷酶AcCel16的克隆与构建 | 第62-64页 |
| 4.3.3 葡聚糖苷酶AcCel16的表达与纯化 | 第64-65页 |
| 4.3.4 酶底物特异性测定 | 第65-66页 |
| 4.3.5 最适pH及酸碱耐受性测定 | 第66-67页 |
| 4.3.6 最适温度及热稳定性测定 | 第67-69页 |
| 4.3.7 化学试剂及金属离子对酶活力的影响 | 第69页 |
| 4.3.8 酶促反应动力学 | 第69-70页 |
| 4.4 小结 | 第70-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 附录 | 第78-81页 |
| 作者简介 | 第81页 |
| 硕士期间科研成果 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
