| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 第一章 引言 | 第12-16页 |
| 1.1 弓形虫病及其危害 | 第12页 |
| 1.2 弓形虫及其生活史 | 第12-13页 |
| 1.3 抗弓形虫药物的研究现状 | 第13-14页 |
| 1.4 热休克家族蛋白的作为药物靶点的研究现状 | 第14-15页 |
| 1.5 CRISPR/Cas9技术及其在药物靶点筛选中的应用 | 第15页 |
| 1.6 研究的目的与意义 | 第15-16页 |
| 第二章 TgClpB1/B2的鉴定及亚细胞定位分析 | 第16-27页 |
| 2.1 材料 | 第16-17页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第16页 |
| 2.1.2 实验材料 | 第16-17页 |
| 2.2 方法 | 第17-22页 |
| 2.2.1 弓形虫编码Clp家族蛋白序列分析 | 第17页 |
| 2.2.2 原核表达质粒pET-28a-TgClpB1/B2/B3的构建 | 第17-20页 |
| 2.2.3 TgClpB1/B2/B3蛋白的原核表达及纯化 | 第20-21页 |
| 2.2.4 TgClpB1/B2/B3多克隆抗体的制备 | 第21页 |
| 2.2.5 TgClpB1/B2/B3多克隆抗体的鉴定 | 第21页 |
| 2.2.6 TgClpB1/B2稳定表达虫株的构建 | 第21-22页 |
| 2.2.7 TgClpB1/B2的亚细胞定位分析 | 第22页 |
| 2.3 实验结果 | 第22-26页 |
| 2.3.1 弓形虫Clp家族蛋白序列分析 | 第22-23页 |
| 2.3.2 TgClpB1/B2/B3序列分析和功能区的鉴定 | 第23页 |
| 2.3.3 TgClpB1/B2/B3重组蛋白的原核表达 | 第23页 |
| 2.3.4 TgClpB1/B2/B3多克隆抗体的鉴定 | 第23-24页 |
| 2.3.5 TgClpB1/B2稳定表达虫株的鉴定 | 第24-25页 |
| 2.3.6 TgClpB1/B2的亚细胞定位 | 第25-26页 |
| 2.4 讨论 | 第26页 |
| 2.5 结论 | 第26-27页 |
| 第三章 TgClpB1和TgClpB2作为抗弓形虫潜在药物靶点的鉴定 | 第27-36页 |
| 3.1 材料 | 第27-28页 |
| 3.1.1 主要仪器 | 第27页 |
| 3.1.2 实验材料 | 第27-28页 |
| 3.2 方法 | 第28-30页 |
| 3.2.1 TgClpB1/B2敲除质粒的构建 | 第28页 |
| 3.2.2 TgClpB1/B2敲除虫株的构建、筛选及鉴定 | 第28-29页 |
| 3.2.3 TgClpB1/B2补回质粒的构建 | 第29页 |
| 3.2.4 TgClpB1/B2基因补回虫株的构建、筛选及鉴定 | 第29页 |
| 3.2.5 TgClpB1/B2基因敲除虫株生长水平的检测 | 第29页 |
| 3.2.6 TgClpB1/B2敲除虫株复制水平的检测 | 第29页 |
| 3.2.7 TgClpB1/B2敲除对虫体抗热压能力的检测 | 第29-30页 |
| 3.2.8 TgClpB1/B2敲除虫株逸出水平的检测 | 第30页 |
| 3.2.9 统计学分析 | 第30页 |
| 3.3 实验结果 | 第30-34页 |
| 3.3.1 构建TgClpB1/B2基因敲除质粒 | 第30-31页 |
| 3.3.2 构建TgClpB1/B2补回质粒 | 第31页 |
| 3.3.3 构建TgClpB1/B2敲除和对应补回虫株及鉴定 | 第31-32页 |
| 3.3.4 TgClpB1/B2基因缺失后对虫株生长水平的影响 | 第32-33页 |
| 3.3.5 TgClpB1/B2基因缺失对虫体复制水平的影响 | 第33页 |
| 3.3.6 热激对TgClpB1基因敲除虫株生长水平的影响 | 第33页 |
| 3.3.7 TgClpB1/B2基因对虫株抗热能力的影响 | 第33-34页 |
| 3.4 讨论 | 第34-35页 |
| 3.5 小结 | 第35-36页 |
| 第四章 TgClpB3作为抗弓形虫潜在药物靶点的鉴定 | 第36-42页 |
| 4.1 材料 | 第36页 |
| 4.1.1 主要仪器 | 第36页 |
| 4.1.2 实验材料 | 第36页 |
| 4.2 方法 | 第36-38页 |
| 4.2.1 TgClpB3和TgACP稳定表达质粒的构建 | 第36-37页 |
| 4.2.2 TgClpB3稳定表达虫株的构建 | 第37页 |
| 4.2.3 TgClpB3-FLAG和TgACP-HA基因稳定共表达虫株的构建 | 第37页 |
| 4.2.4 TgClpB3的亚细胞定位分析 | 第37-38页 |
| 4.2.5 TgClpB3敲除质粒的构建 | 第38页 |
| 4.2.6 TgClpB3敲除虫株的构建和筛选 | 第38页 |
| 4.3 实验结果 | 第38-40页 |
| 4.3.1 构建TgClpB3稳定表达虫株 | 第38-39页 |
| 4.3.2 TgClpB3在细胞内虫体的亚细胞定位 | 第39页 |
| 4.3.3 TgClpB3基因敲除质粒鉴定 | 第39页 |
| 4.3.4 TgClpB3基因敲除虫株的构建 | 第39-40页 |
| 4.4 讨论 | 第40页 |
| 4.5 结论 | 第40-42页 |
| 第五章 全文结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 作者简历 | 第50页 |
