| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-39页 |
| 1.1 黄症病毒科病毒的研究现状 | 第13-19页 |
| 1.1.1 寄主范围 | 第13页 |
| 1.1.2 病毒的分类 | 第13-14页 |
| 1.1.3 基因组的结构 | 第14-17页 |
| 1.1.4 病毒的检测方法 | 第17-18页 |
| 1.1.5 病毒的传播方式 | 第18-19页 |
| 1.2 黄症病毒科病毒的介体传播机制研究 | 第19-27页 |
| 1.2.1 受体蛋白 | 第21-23页 |
| 1.2.2 跨膜运输蛋白 | 第23-25页 |
| 1.2.3 免疫防御体系 | 第25-27页 |
| 1.3 介体与病毒互作的常用研究方法 | 第27-30页 |
| 1.3.1 病毒粒子覆盖 | 第27页 |
| 1.3.2 双向差异凝胶电泳 | 第27-28页 |
| 1.3.3 活性为基础的蛋白质图谱分析技术 | 第28页 |
| 1.3.4 噬菌体展示技术 | 第28-29页 |
| 1.3.5 存在的问题 | 第29-30页 |
| 1.4 蛋白互作研究技术 | 第30-37页 |
| 1.4.1 GAL4 酵母双杂交系统 | 第30-32页 |
| 1.4.2 Split-ubiqitin 膜酵母双杂交系统 | 第32-34页 |
| 1.4.3 昆虫双杂交系统 | 第34-35页 |
| 1.4.4 双分子荧光互补 | 第35页 |
| 1.4.5 免疫共沉淀 | 第35-36页 |
| 1.4.6 Pull-down 检测 | 第36-37页 |
| 1.4.7 免疫荧光共定位 | 第37页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第37-39页 |
| 第二章 基础材料和方法 | 第39-67页 |
| 2.1 试剂与仪器 | 第39-41页 |
| 2.1.1 试剂和耗材 | 第39-40页 |
| 2.1.2 仪器 | 第40-41页 |
| 2.2 材料 | 第41-42页 |
| 2.2.1 蚜虫样品 | 第41页 |
| 2.2.2 植物样品 | 第41页 |
| 2.2.3 菌株与载体质粒 | 第41-42页 |
| 2.3 方法 | 第42-67页 |
| 2.3.1 生物学检测和取样方法 | 第42页 |
| 2.3.2 分子克隆和表达载体构建 | 第42-51页 |
| 2.3.3 蛋白的表达、提取和检测 | 第51-58页 |
| 2.3.4 抗体制备 | 第58-59页 |
| 2.3.5 酵母操作方法 | 第59-61页 |
| 2.3.6 真核生物基因的全长扩增 | 第61-65页 |
| 2.3.7 生物信息学分析方法 | 第65-67页 |
| 第三章 GAL4 酵母双杂交系统筛选和小麦黄矮病毒互作的禾谷缢管蚜蛋白 | 第67-81页 |
| 3.1 材料和方法 | 第67-75页 |
| 3.1.1 诱饵蛋白的融合表达 | 第67-69页 |
| 3.1.2 禾谷缢管蚜酵母文库构建 | 第69-73页 |
| 3.1.3 文库滴度检测 | 第73页 |
| 3.1.4 文库筛选对照试验：mating 法 | 第73-74页 |
| 3.1.5 诱饵质粒筛选文库：mating 法 | 第74-75页 |
| 3.1.6 猎物质粒挽救 | 第75页 |
| 3.1.7 二次互作验证 | 第75页 |
| 3.2 结果和分析 | 第75-81页 |
| 3.2.1 诱饵质粒构建 | 第75-76页 |
| 3.2.2 诱饵质粒在 Y2HGold 中的自激活检测 | 第76-77页 |
| 3.2.3 诱饵质粒在 Y2HGold 中的毒性检测 | 第77-78页 |
| 3.2.4 诱饵质粒在 Y2HGold 中的表达检测 | 第78-79页 |
| 3.2.5 Y187 酵母文库构建 | 第79页 |
| 3.2.6 诱饵筛取酵母文库：mating 法 | 第79-81页 |
| 3.2.7 猎物质粒挽救 | 第81页 |
| 3.2.8 二次互作验证 | 第81页 |
| 3.3 结论和讨论 | 第81页 |
| 第四章 Split-ubiquitin 膜酵母双杂交系统筛选和小麦黄矮病毒互作的禾谷缢管蚜蛋白71 | 第81-103页 |
| 4.1 材料和方法 | 第83-92页 |
| 4.1.1 诱饵蛋白的融合表达 | 第83-85页 |
| 4.1.2 禾谷缢管蚜 NubG-X cDNA 质粒文库构建 | 第85-89页 |
| 4.1.3 优化筛库条件 | 第89-90页 |
| 4.1.4 诱饵筛库 | 第90-91页 |
| 4.1.5 猎物质粒挽救 | 第91-92页 |
| 4.1.6 二次互作验证 | 第92页 |
| 4.2 结果和结论 | 第92-101页 |
| 4.2.1 诱饵蛋白的跨膜区分析 | 第92-94页 |
| 4.2.2 诱饵质粒构建 | 第94-95页 |
| 4.2.3 诱饵的 western blotting 检测 | 第95页 |
| 4.2.4 诱饵的功能检测 | 第95-97页 |
| 4.2.5 禾谷缢管蚜 NubG-X 质粒文库构建 | 第97-98页 |
| 4.2.6 优化筛库条件 | 第98页 |
| 4.2.7 诱饵筛库 | 第98-99页 |
| 4.2.8 猎物质粒挽救 | 第99-100页 |
| 4.2.9 二次互作验证 | 第100-101页 |
| 4.3 结论和讨论 | 第101-103页 |
| 第五章 Chemiluminescent Co-IP 验证蛋白互作 | 第103-119页 |
| 5.1 材料和方法 | 第103-108页 |
| 5.1.1 诱饵载体构建 | 第103页 |
| 5.1.2 猎物载体构建 | 第103-105页 |
| 5.1.3 共转染哺乳动物细胞 | 第105-106页 |
| 5.1.4 诱饵蛋白和猎物蛋白的表达检测 | 第106页 |
| 5.1.5 制备细胞裂解液 | 第106-107页 |
| 5.1.6 Chemiluminescent Co-IP 检测 | 第107-108页 |
| 5.2 结果和分析 | 第108-117页 |
| 5.2.1 诱饵载体构建 | 第108-109页 |
| 5.2.2 猎物载体构建 | 第109-111页 |
| 5.2.3 诱饵蛋白的表达检测 | 第111-114页 |
| 5.2.4 猎物蛋白的表达检测 | 第114-115页 |
| 5.2.5 互作检测 | 第115-117页 |
| 5.3 结论和讨论 | 第117-119页 |
| 第六章 禾谷缢管蚜体内植物病毒和内源基因 RT-qPCR 检测技术的建立 | 第119-153页 |
| 6.1 材料和方法 | 第119-128页 |
| 6.1.1 蚜虫样品 | 第119页 |
| 6.1.2 植物样品 | 第119页 |
| 6.1.3 带毒蚜虫取样方法 | 第119-120页 |
| 6.1.4 内参基因和目标基因的克隆和测序 | 第120-123页 |
| 6.1.5 Reverse Transcription-quantitative Polymerase Chain Reaction (RT-qPCR) | 第123-126页 |
| 6.1.6 数据分析方法 | 第126-128页 |
| 6.2 结果与分析 | 第128-151页 |
| 6.2.1 样品总 RNA 的提取结果 | 第128-129页 |
| 6.2.2 内参基因和目标基因的 RT-PCR 扩增 | 第129-130页 |
| 6.2.3 禾谷缢管蚜内参基因和目标基因核苷酸序列的相似性分析 | 第130-131页 |
| 6.2.4 少量蚜虫样品的总 RNA 提取结果 | 第131-132页 |
| 6.2.5 内参基因和目标基因的扩增效率 | 第132-137页 |
| 6.2.6 内参基因 Cq 值的箱线分布图 | 第137页 |
| 6.2.7 内参基因 Cq 值的差异分析 | 第137-138页 |
| 6.2.8 内参基因表达稳定性分析 | 第138-140页 |
| 6.2.9 内参基因数量的选择 | 第140-142页 |
| 6.2.10 目标基因的相对定量分析 | 第142-151页 |
| 6.3 结论和讨论 | 第151-153页 |
| 第七章 全文结论和进一步研究设想 | 第153-155页 |
| 7.1 全文结论 | 第153-154页 |
| 7.2 进一步研究设想 | 第154-155页 |
| 参考文献 | 第155-166页 |
| 附录 | 第166-176页 |
| 致谢 | 第176-177页 |
| 作者简介 | 第177页 |
| 博士期间发表论文 | 第177页 |
