中文摘要 | 第12-16页 |
英文摘要 | 第16-21页 |
前言 | 第22-28页 |
参考文献 | 第25-28页 |
第一部分 基于微流控芯片技术可疑致癌炎症因子的高通量筛选 | 第28-42页 |
(三) 引言 | 第28页 |
(四) 材料方法 | 第28-34页 |
1.材料 | 第28-32页 |
1.1 仪器 | 第28-29页 |
1.2 组织及细胞 | 第29页 |
1.3 试剂 | 第29-31页 |
1.4 试剂配制 | 第31-32页 |
2.方法 | 第32-34页 |
2.1 微流控芯片制作 | 第32页 |
2.2 肺癌细胞和癌旁支气管上皮细胞原代培养 | 第32-33页 |
2.3 微流控芯片上肺癌细胞和支气管上皮细胞培养 | 第33页 |
2.4 免疫荧光细胞化学 | 第33页 |
2.5 Real-time PCR | 第33-34页 |
2.6 Western blot | 第34页 |
2.7 免疫组化 | 第34页 |
2.8 统计学分析 | 第34页 |
(五) 结果 | 第34-40页 |
1.高通量筛选功能的微流控芯片构建 | 第34-35页 |
2.肺癌细胞和癌旁支气管上皮细胞原代培养 | 第35-37页 |
2.1 肺癌组织和癌旁组织病理确认结果 | 第35-36页 |
2.2 肺癌细胞和癌旁支气管上皮细胞原代培养 | 第36-37页 |
3.基于微流控芯片技术可疑炎症因子的高通量筛选 | 第37-38页 |
3.1 微流控芯片平台肺癌细胞和癌旁支气管上皮细胞培养 | 第37页 |
3.2 微流控芯片平台肺癌细胞和癌旁支气管上皮细胞可疑炎症因子表达 | 第37-38页 |
4.传统分子生物学技术可疑炎症因子的高通量筛选 | 第38-40页 |
4.1 免疫组化检测 | 第38-39页 |
4.2 Western blot 检测 | 第39-40页 |
4.3 Real-time PCR 检测 | 第40页 |
(六) 讨论 | 第40-42页 |
(七) 小结 | 第42页 |
第二部分 基于微流控芯片技术 COPD 香烟再暴露致恶性转化的研究 | 第42-59页 |
(三) 引言 | 第43-44页 |
(四) 材料方法 | 第44-49页 |
1.材料 | 第44-47页 |
1.1 仪器 | 第44页 |
1.2 组织及细胞 | 第44页 |
1.3 试剂 | 第44-46页 |
1.4 试剂配制 | 第46-47页 |
2.方法 | 第47-49页 |
2.1 微流控芯片制作 | 第47页 |
2.2 香烟烟雾提取物 CSE 制备 | 第47页 |
2.3 微流控芯片支气管上皮细胞 CSE 再暴露 | 第47-48页 |
2.4 细胞增殖和凋亡检测 | 第48页 |
2.5 ROS 检测 | 第48页 |
2.6 免疫荧光细胞化学 | 第48页 |
2.7 Western blot | 第48页 |
2.8 软琼脂克隆形成实验 | 第48-49页 |
2.9 染色体制备 | 第49页 |
2.10 统计学分析 | 第49页 |
(五) 结果 | 第49-57页 |
1.香烟再暴露微流控芯片研究平台的构建 | 第49-50页 |
2.CSE对人支气管上皮细胞凋亡和增殖的影响 | 第50-51页 |
3.CSE可以激活人支气管上皮细胞ROS和相关炎症分子通路 | 第51-53页 |
4.CSE可以促进支气管上皮细胞发生上皮-间质转化(EMT)42 | 第53-54页 |
5.CSE可以促进支气管上皮细胞发生瘤样变 | 第54-57页 |
(六) 讨论 | 第57-59页 |
(七) 小结 | 第59页 |
第三部分 基于仿生肺芯片 NF-κB、COX2、STAT3、GRP78 在支气管上皮细胞恶性转化的作用研究 | 第59-79页 |
(三) 前言 | 第60页 |
(四) 材料方法 | 第60-68页 |
1.材料 | 第60-64页 |
1.1 仪器 | 第60-61页 |
1.2 细胞和动物 | 第61页 |
1.3 试剂、药品及耗材 | 第61-63页 |
1.4 试剂配制 | 第63-64页 |
2.方法 | 第64-68页 |
2.1 微流控芯片制作 | 第64页 |
2.2 细胞复苏、传代及冻存 | 第64页 |
2.3 CCK8 细胞毒性检测 | 第64页 |
2.4 ELISA 检测 | 第64-65页 |
2.5 仿生肺芯片的构建 | 第65页 |
2.6 仿生肺芯片支气管上皮细胞染毒 | 第65-66页 |
2.7 免疫荧光细胞化学 | 第66页 |
2.8 流式细胞周期检测 | 第66-67页 |
2.9 Western blot | 第67页 |
2.10 软琼脂实验及克隆扩增实验 | 第67页 |
2.11 裸鼠成瘤实验 | 第67页 |
2.12 统计学分析 | 第67-68页 |
(五) 结果 | 第68-77页 |
1.仿生肺芯片的构建 | 第68-69页 |
1.1 仿生肺芯片的设计 | 第68页 |
1.2 仿生肺芯片细胞培养 | 第68-69页 |
2.仿生肺芯片支气管上皮细胞恶性转化模型构建 | 第69-77页 |
2.1 细胞形态学检测 | 第69页 |
2.2 接触抑制消失 | 第69-70页 |
2.3 细胞因子检测 | 第70-71页 |
2.4 细胞周期检测 | 第71-73页 |
2.5 软琼脂克隆形成 | 第73-74页 |
2.6 裸鼠成瘤实验 | 第74-75页 |
2.7 支气管上皮细胞恶性转化过程中的分子变化 | 第75-77页 |
(六) 讨论 | 第77-79页 |
(七) 小结 | 第79页 |
第四部分 基于动物肺癌模型 NF-κB、COX2、STAT3、GRP78在支气管上皮恶性转化的作用研究 | 第79-94页 |
(三) 前言 | 第80页 |
(四) 材料方法 | 第80-84页 |
1.材料 | 第80-82页 |
1.1 仪器 | 第80-81页 |
1.2 动物 | 第81页 |
1.3 试剂、药品 | 第81-82页 |
1.4 试剂配制 | 第82页 |
2.方法 | 第82-84页 |
2.1 动物 COPD 模型制备 | 第82-83页 |
2.2 动物 COPD 模型标本采集和检测 | 第83页 |
2.3 动物肺癌模型的制备 | 第83页 |
2.4 动物体内 RNA 干扰 | 第83页 |
2.5 动物肺癌模型标本采集和检测 | 第83-84页 |
2.6 组织包埋及病理检测 | 第84页 |
2.7 统计学分析 | 第84页 |
(五) 结果 | 第84-91页 |
1.大鼠 COPD 模型建立及验证 | 第84-85页 |
1.1 大鼠一般情况观察 | 第84页 |
1.2 血常规及 BALF 检测 | 第84-85页 |
1.3 肺组织病理学检查 | 第85页 |
2.大鼠肺癌模型建立及验证 | 第85-91页 |
2.1 大鼠肺癌 X 线筛查 | 第85页 |
2.2 大鼠体内 RNA 干扰 | 第85-88页 |
2.3 大鼠肺癌模型建立及验证 | 第88-90页 |
2.4 大鼠肺癌发生率统计 | 第90-91页 |
(六) 讨论 | 第91-93页 |
(七) 小结 | 第93-94页 |
参考文献 | 第94-99页 |
综述 | 第99-111页 |
参考文献 | 第105-111页 |
攻读学位期间发表文章情况 | 第111-112页 |
致谢 | 第112-113页 |