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球孢白僵菌组氨酸激酶家族、核激酶Weel和磷酸化酶Cdc25的功能解析

致谢第7-11页
摘要第11-14页
1 真菌组氨酸激酶家族与细胞周期调控因子的研究现状第14-24页
    1.1 真菌的组氨酸激酶家族第14-20页
        1.1.1 双组分信号传导系统第14-15页
        1.1.2 酵母类真菌组氨酸激酶的类型、结构及功能第15-18页
        1.1.3 丝状真菌组裁酸激酵的类型、结构及功能第18-20页
    1.2 真菌核激酶Wee1和磷酸化酶Cdc25与细胞周期第20-23页
        1.2.1 细胞周期概述第20页
        1.2.2 驱动细胞周期的关键分子第20-22页
        1.2.3 Wee1和Cdc25对Cdk1活性的平衡作用第22-23页
    1.3 展望第23-24页
2 球孢白僵菌组氨酸激酶家族的功能解析第24-47页
    2.1 材料第25-26页
        2.1.1 菌株及培养条件第25页
        2.1.2 试剂及试剂盒第25-26页
    2.2 方法第26-34页
        2.2.1 真菌核酸提取第26-27页
        2.2.2 球孢白僵菌HK的鉴定及分类第27页
        2.2.3 球孢白僵菌HK的转录动态分析第27-28页
        2.2.4 球孢白僵菌HK基因的敲除/回补菌株的构建与鉴定第28-31页
        2.2.5 表型分析第31-33页
        2.2.6 抗逆相关基因的转录分析第33页
        2.2.7 Hog1和Slt2磷酸化水平的检测第33-34页
        2.2.8 数据处理与分析第34页
    2.3 结果与分析第34-44页
        2.3.1 球孢白僵菌HK家族的结构、分类与转录表达特征第34-36页
        2.3.2 球孢白僵菌8个HK基因突变株的鉴定第36-37页
        2.3.3 HK基因缺失对生长和产孢的影响第37-38页
        2.3.4 HK基因缺失影响细胞对化学胁迫的敏感性第38-40页
        2.3.5 HK基因缺失影响分生孢子对高温和紫外辐射的耐受力第40-41页
        2.3.6 HK3失活改变Hog1和Slt2的磷酸化水平第41页
        2.3.7 HK3失活影响抗氧化酶系基因和转运蛋白基因的转录表达第41页
        2.3.8 HK8失活对表型相关基因的转录表达及HOG信号通路的影响第41-44页
    2.4 讨论第44-47页
3 球孢白僵菌光敏蛋白Bbphy通过光周期、红光及红外光感应控制生长和无性发育第47-56页
    3.1 材料和方法第47-49页
        3.1.1 菌株、培养基和试剂第48页
        3.1.2 不同营养基质上菌落生长速率测定第48页
        3.1.3 不同光周期下生长速率与分生孢子产量测定第48页
        3.1.4 光敏反应调控无性发育的测定第48页
        3.1.5 产孢相关基因和相关光感受器基因的转录水平测定第48-49页
    3.2 结果与分析第49-55页
        3.2.1 球孢白僵菌Phy(Bbphy)的蛋白序列结构分析第49页
        3.2.2 敲除Bbphy影响营养利用和菌落生长第49-51页
        3.2.3 Bbphy通过感应光周期和光质变化调控分生孢子产量第51-53页
        3.2.4 表型相关基因转录水平的变化第53-55页
    3.3 讨论第55-56页
4 球孢白僵菌核激酶Wee1和磷酸化酶Cdc25的功能分析第56-76页
    4.1 材料第57页
        4.1.1 菌株及其培养条件第57页
        4.1.2 试剂及试剂盒第57页
    4.2 方法第57-63页
        4.2.1 球孢白僵菌cdk1、wee1和cdc25基因的克隆与鉴定第57页
        4.2.2 球孢白僵菌Cdk1基因的超表达和点突变第57-60页
        4.2.3 wee1和cdc25单基因缺失菌株和回补菌株的构建第60页
        4.2.4 wee1和cdc25的双基因敲除株构建第60页
        4.2.5 Western杂交第60-61页
        4.2.6 表型分析第61-63页
    4.3 实验结果第63-73页
        4.3.1 Cdk1的The~(14)/Tyr~(15)磷酸化改变细胞周期和菌丝隔膜密度第63-64页
        4.3.2 wee1和cdc25的单基因和双基因敲除影响Cdk1的活性第64-66页
        4.3.3 Wee1和Cdc25的基因缺失改变菌丝隔膜形态、细胞大小和周期第66-69页
        4.3.4 Wee1和Cdc25的基因缺失对球孢白僵菌生长和无性发育的影响第69-70页
        4.3.5 Wee1和Cdc25的基因缺失对球孢白僵菌抗逆性状及毒力的影响第70-73页
    4.4 讨论第73-76页
5 结语第76-77页
参考文献第77-85页
Summary第85-87页
附录:博士期间的主要成果第88页

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