| 中文摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 1 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 RBSDV和RSV | 第10-13页 |
| 1.1.1 RBSDV和RSV分类和种属形态 | 第10-11页 |
| 1.1.2 RBSDV和RSV传毒介体 | 第11页 |
| 1.1.3 RBSDV和RSV发病症状 | 第11-12页 |
| 1.1.4 RBSDV和RSV基因组的结构与功能 | 第12-13页 |
| 1.2 基因沉默 | 第13-17页 |
| 1.2.1 转录后基因沉默在生物界的广泛性 | 第14页 |
| 1.2.2 RNA干扰的机理 | 第14-15页 |
| 1.2.3 RNA介导的病毒抗性 | 第15-16页 |
| 1.2.4 RNA介导病毒抗性的特点 | 第16页 |
| 1.2.5 原核表达dsRNA抗病毒的研究 | 第16-17页 |
| 1.3 本研究的目的及其意义 | 第17-19页 |
| 2 材料方法 | 第19-42页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 毒源 | 第19页 |
| 2.1.2 供试植物 | 第19页 |
| 2.1.3 菌株 | 第19页 |
| 2.1.4 常见缓冲液及培养基的配制 | 第19页 |
| 2.1.5 常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第19-20页 |
| 2.2 方法 | 第20-42页 |
| 2.2.1 原核表达载体构建 | 第20-31页 |
| 2.2.2 dsRNA的优化表达、提取和分析 | 第31-33页 |
| 2.2.3 dsRNA介导的田间病毒防效鉴定 | 第33-34页 |
| 2.2.4 供试植株的ELISA检测 | 第34-35页 |
| 2.2.5 Northern杂交分析 | 第35-39页 |
| 2.2.6 siRNA的提取和杂交 | 第39-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-58页 |
| 3.1 RBSDV和RSV的CP基因dsRNA原核表达载体构建 | 第42-46页 |
| 3.1.1 GUS片段PCR扩增 | 第42页 |
| 3.1.2 GUS片段与pGEM载体连接 | 第42-43页 |
| 3.1.3 RBSDV和RSV外壳蛋白基因(CP基因)正向和反向目的片段的获得 | 第43页 |
| 3.1.4 正向目的片段与载体pGEM-GUS连接 | 第43-44页 |
| 3.1.5 反向目的片段与重组中间载体连接 | 第44-45页 |
| 3.1.6 重组表达载体转化大肠杆菌M-JM109lacY菌株 | 第45-46页 |
| 3.2 dsRNA诱导表达条件的优化 | 第46-49页 |
| 3.2.1 IPTG浓度对dsRNA诱导表达产量的影响 | 第46页 |
| 3.2.2 诱导温度对dsRNA诱导表达产量的影响 | 第46-47页 |
| 3.2.3 诱导时间对dsRNA诱导表达产量的影响 | 第47-48页 |
| 3.2.4 组合诱导条件对dsRNA诱导表达产量的影响 | 第48-49页 |
| 3.3 dsRNA介导的田间病毒防效鉴定 | 第49-56页 |
| 3.4 供试水稻植株的Northern blot杂交分析 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第75-76页 |
| 附录 | 第76-82页 |
