| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文縮略词 | 第8-12页 |
| 1 绪论 | 第12-21页 |
| 1.1 microRNA | 第12-15页 |
| 1.1.1 microRNA的发现及成熟过程 | 第12-13页 |
| 1.1.2 microRNAs与疾病的关系 | 第13-14页 |
| 1.1.3 microRNAs在疾病诊断与治疗中的作用 | 第14-15页 |
| 1.2. 宫颈癌 | 第15-16页 |
| 1.2.1 宫颈癌简介 | 第15-16页 |
| 1.2.2 microRNAs与宫颈癌 | 第16页 |
| 1.3 microRNA-1246 | 第16-19页 |
| 1.4 microRNAs的研究思路 | 第19页 |
| 1.5 本课题研究内容 | 第19-21页 |
| 2 宫颈癌中miR-1246的表达及临床意义探讨 | 第21-30页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.2.1 研究对象 | 第21页 |
| 2.2.2 实验耗材、仪器及试剂 | 第21-22页 |
| 2.2.3 实验试剂 | 第22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-24页 |
| 2.3.1 标本采集 | 第22页 |
| 2.3.2 RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.3.3 RNA完整性及浓度的测定 | 第23页 |
| 2.3.4 逆转录及实时荧光定量PCR | 第23-24页 |
| 2.4 结果 | 第24-29页 |
| 2.4.1 RNA完整性及浓度测定 | 第24-25页 |
| 2.4.2 标准曲线 | 第25-26页 |
| 2.4.3 融解曲线 | 第26页 |
| 2.4.4 miR-1246在宫颈癌组织中的差异表达 | 第26-27页 |
| 2.4.5 宫颈癌组织中miR-1246的表达与临床病理特征的关系 | 第27-29页 |
| 2.5 讨论 | 第29页 |
| 2.6 本章小结 | 第29-30页 |
| 3 宫颈癌中miR-1246的表达与HPV16E6的关系探讨 | 第30-44页 |
| 3.1 引言 | 第30页 |
| 3.2 实验材料 | 第30-32页 |
| 3.2.1 细胞及质粒来源 | 第30页 |
| 3.2.2 实验耗材 | 第30页 |
| 3.2.3 实验试剂 | 第30-31页 |
| 3.2.4 实验仪器 | 第31-32页 |
| 3.3 实验方法 | 第32-36页 |
| 3.3.1 HPV16检测 | 第32页 |
| 3.3.2 细胞培养 | 第32-33页 |
| 3.3.2.1 细胞传代 | 第32页 |
| 3.3.2.2 细胞复苏及冻存 | 第32-33页 |
| 3.3.3 质粒活化及抽提 | 第33页 |
| 3.3.3.1 质粒活化 | 第33页 |
| 3.3.3.2 质粒抽提 | 第33页 |
| 3.3.4 转染实验 | 第33-34页 |
| 3.3.5 RT-qPCR | 第34页 |
| 3.3.6 western blot检测DYRK1A的表达 | 第34-36页 |
| 3.3.6.1 细胞总蛋白提取 | 第34页 |
| 3.3.6.2 总蛋白浓度测定 | 第34-35页 |
| 3.3.6.3 western blot | 第35-36页 |
| 3.4 结果 | 第36-41页 |
| 3.4.1 质粒活化及抽提 | 第36页 |
| 3.4.2 细胞转染前后的形态学变化 | 第36页 |
| 3.4.3 蛋白标准曲线 | 第36页 |
| 3.4.4 组织样本中HPV16感染情况 | 第36-38页 |
| 3.4.5 miR-1246在宫颈癌各细胞系的表达 | 第38-39页 |
| 3.4.6 SiHa细胞HPV16E6敲除 | 第39-40页 |
| 3.4.7 C33A细胞HPV16E6过表达 | 第40-41页 |
| 3.5 讨论 | 第41-43页 |
| 3.6 本章小结 | 第43-44页 |
| 4 miR-1246对宫颈癌细胞系增殖、迁移、细胞周期等的影响 | 第44-58页 |
| 4.1 引言 | 第44页 |
| 4.2 材料与方法 | 第44页 |
| 4.2.1 实验材料及仪器 | 第44页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第44页 |
| 4.3 实验方法 | 第44-47页 |
| 4.3.1 细胞转染 | 第44-45页 |
| 4.3.2 CKK-8实验 | 第45页 |
| 4.3.3 划痕实验 | 第45页 |
| 4.3.4 transwell迁移实验 | 第45-46页 |
| 4.3.5 克隆形成实验 | 第46页 |
| 4.3.6 细胞周期与凋亡实验 | 第46-47页 |
| 4.4 结果 | 第47-56页 |
| 4.4.1 C33A细胞转染实验 | 第47-49页 |
| 4.4.2 CKK-8检测C33A细胞转染后对细胞增殖的影响 | 第49-50页 |
| 4.4.3 划痕实验 | 第50-52页 |
| 4.4.4 transwell迁移实验 | 第52-53页 |
| 4.4.5 克隆形成实验 | 第53-54页 |
| 4.4.6 流式细胞仪分析细胞周期 | 第54-56页 |
| 4.5 讨论 | 第56-57页 |
| 4.6 本章小结 | 第57-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 硕士期间研究成果 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
