| 致谢 | 第4-5页 |
| 中文摘要 | 第5-7页 |
| 英文摘要 | 第7页 |
| 第一章 单克隆抗体及其在植物病毒学中的应用 | 第15-32页 |
| 1 抗体的基本结构特性 | 第15-17页 |
| 2 单克隆抗体制备技术 | 第17-19页 |
| 2.1 杂交瘤技术 | 第17页 |
| 2.2 噬菌体抗体库技术 | 第17-19页 |
| 3 单克隆抗体在植物病毒学中的应用 | 第19-25页 |
| 3.1 病毒病害的诊断和检测 | 第19-21页 |
| 3.2 病毒株系鉴定及分离物分型 | 第21-22页 |
| 3.3 病毒蛋白抗原表位分析 | 第22-23页 |
| 3.4 作为探针分析病毒基因产物的功能 | 第23-24页 |
| 3.5 植物抗病毒基因工程(抗体策略) | 第24-25页 |
| 4 植物病毒学中常用的免疫检测方法 | 第25-28页 |
| 4.1 沉淀法 | 第25-26页 |
| 4.2 酶联免疫吸附检测(ELISA) | 第26页 |
| 4.3 印迹检测 | 第26-27页 |
| 4.4 免疫胶体金技术 | 第27页 |
| 4.5 免疫捕获反转录PCR | 第27-28页 |
| 参考文献 | 第28-32页 |
| 第二章 烟草花叶病毒属病毒与寄主植物互作机理研究进展 | 第32-51页 |
| 1 病毒的基因组结构 | 第32页 |
| 2 病毒的侵染循环 | 第32-34页 |
| 3 病毒与寄主植物相关因子的互作 | 第34-41页 |
| 3.1 复制酶与寄主因子的互作 | 第34-36页 |
| 3.2 病毒在胞间移动过程中与寄主因子的互作 | 第36-39页 |
| 3.2.1 病毒胞间移动的特点 | 第36-37页 |
| 3.2.2 MP在寄主植物体内的磷酸化 | 第37页 |
| 3.2.3 MP与其他病毒因子的互作 | 第37-38页 |
| 3.2.4 MP与寄主体内因子的互作 | 第38-39页 |
| 3.3 病毒在长距离移动过程中与寄主因子的互作 | 第39-41页 |
| 4 寄主对病毒的防御和病毒对寄主的反防御 | 第41-45页 |
| 4.1 过敏性反应 | 第41-43页 |
| 4.1.1 N基因及其激发子 | 第42-43页 |
| 4.1.2 Tm-2~2基因及其激发子 | 第43页 |
| 4.1.3 其他R基因及其激发子 | 第43页 |
| 4.2 RNA沉默和RNA沉默抑制 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| 第三章 材料与方法 | 第51-68页 |
| 1 材料 | 第52页 |
| 1.1 毒源 | 第52页 |
| 1.2 抗血清 | 第52页 |
| 1.3 常用生化试剂 | 第52页 |
| 1.4 常用缓冲液的配制 | 第52页 |
| 2 方法 | 第52-67页 |
| 2.1 植物病毒的纯化 | 第52-54页 |
| 2.1.1 病毒接种 | 第52页 |
| 2.1.2 病毒提纯 | 第52-54页 |
| 2.1.3 病毒粒子的电镜观察 | 第54页 |
| 2.1.4 提纯病毒紫外检测 | 第54页 |
| 2.2 多克隆与单克隆抗体的制备及检测方法 | 第54-57页 |
| 2.2.1 多抗血清的制备 | 第54-55页 |
| 2.2.2 单克隆抗体制备 | 第55-57页 |
| 2.3 Western印迹分析 | 第57-59页 |
| 2.3.1 SDS-PAGE | 第57-58页 |
| 2.3.2 电转移 | 第58页 |
| 2.3.3 Western印迹分析 | 第58页 |
| 2.3.4 植物可溶性蛋白样品的制备 | 第58-59页 |
| 2.4 病毒RNA抽提及Northern印迹分析 | 第59-61页 |
| 2.4.1 RNA抽提 | 第59页 |
| 2.4.2 甲醛变性电泳 | 第59-60页 |
| 2.4.3 RNA转膜、探针标记及Northern印迹分析 | 第60-61页 |
| 2.5 RT-PCR技术 | 第61-63页 |
| 2.5.1 cDNA第一链合成 | 第61-62页 |
| 2.5.2 普通PCR反应 | 第62页 |
| 2.5.3 PCR产物纯化 | 第62-63页 |
| 2.6 DNA克隆技术 | 第63-66页 |
| 2.6.1 连接方法 | 第63页 |
| 2.6.2 感受态细胞制备方法(TB法) | 第63-64页 |
| 2.6.3 转化 | 第64页 |
| 2.6.4 重组克隆的筛选与鉴定 | 第64-66页 |
| 2.7 外源基因的原核表达及蛋白质纯化 | 第66-67页 |
| 2.7.1 原核表达 | 第66页 |
| 2.7.2 表达产物在变性条件下的大量提取和纯化 | 第66页 |
| 2.7.3 蛋白质含量测定(Bradford法) | 第66-67页 |
| 2.8 DNA序列测定及分析 | 第67页 |
| 参考文献 | 第67-68页 |
| 第四章 番茄花叶病毒单克隆抗体的制备及检测应用 | 第68-77页 |
| 1 材料与方法 | 第68-70页 |
| 1.1 病毒或病叶 | 第68页 |
| 1.2 抗血清 | 第68页 |
| 1.3 抗ToMV单克隆抗体的制备 | 第68-69页 |
| 1.4 间接ELISA | 第69页 |
| 1.5 三抗体夹心ELISA(TAS-ELISA) | 第69页 |
| 1.6 效价测定 | 第69页 |
| 1.7 检测灵敏度测定 | 第69页 |
| 1.8 单克隆抗体的特异性检测 | 第69页 |
| 1.9 Western印迹检测 | 第69-70页 |
| 1.10 ToMV的田间检测 | 第70页 |
| 2 结果 | 第70-75页 |
| 2.1 病毒提纯 | 第70页 |
| 2.2 小鼠免疫 | 第70页 |
| 2.3 杂交瘤细胞的融合、筛选、克隆 | 第70页 |
| 2.4 腹水抗体制备和效价测定 | 第70-71页 |
| 2.5 单克隆抗体的亚类型鉴定 | 第71-72页 |
| 2.6 单克隆抗体对不同植物病毒的特异性测定 | 第72-73页 |
| 2.7 间接ELISA和TAS-ELISA检测方法的比较 | 第73-74页 |
| 2.8 检测灵敏度确定 | 第74页 |
| 2.9 Western印迹分析 | 第74-75页 |
| 2.10 ToMV和TMV的田间检测 | 第75页 |
| 3 讨论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-77页 |
| 第五章 番茄花叶病毒移动蛋白基因在大肠杆菌中的表达及抗血清的制备 | 第77-84页 |
| 1 材料与方法 | 第77-79页 |
| 1.1 菌株和载体 | 第77页 |
| 1.2 MP基因的克隆 | 第77-78页 |
| 1.3 表达载体的构建 | 第78页 |
| 1.4 表达产物在变性条件下的诱导表达和纯化 | 第78页 |
| 1.5 SDS-PAGE和Western印迹检测表达产物 | 第78-79页 |
| 1.6 ToMV MP抗血清的制备 | 第79页 |
| 1.7 感病叶片中ToMV MP的提取及检测 | 第79页 |
| 1.7.1 感病叶片中ToMV MP的提取 | 第79页 |
| 1.7.2 MP的Western印迹检测 | 第79页 |
| 2 结果 | 第79-82页 |
| 2.1 MP基因的克隆及表达载体的构建 | 第79页 |
| 2.2 MP基因的原核表达及表达产物的纯化 | 第79-80页 |
| 2.3 MP抗血清的制备 | 第80页 |
| 2.4 感病叶片中MP的检测结果 | 第80-82页 |
| 3 讨论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-84页 |
| 第六章 烟草花叶病毒和番茄花叶病毒在含N基因烟草上的症状差异是由运动蛋白基因决定的 | 第84-94页 |
| 1 材料与方法 | 第84-86页 |
| 1.1 毒源及供试植物 | 第84-85页 |
| 1.2 病毒提纯 | 第85页 |
| 1.3 TMV、ToMV和T／OMP及病毒MP在烟草中的积累水平比较 | 第85页 |
| 1.4 原生质体的制备及转染 | 第85-86页 |
| 1.5 RNA提取与Northern印迹杂交 | 第86页 |
| 1.6 烟草中防御相关酶的提取和活性测定 | 第86页 |
| 1.6.1 植物多酚氧化酶(PPO)的提取和活性测定 | 第86页 |
| 1.6.2 植物过氧化物酶(POD)的提取和活性测定 | 第86页 |
| 1.6.3 苯丙氨酸解氨酶(PAL)的提取和活性测定 | 第86页 |
| 2 结果 | 第86-90页 |
| 2.1 TMV、ToMV和T／OMP在不同寄主上的症状差异 | 第86-87页 |
| 2.2 TMV、ToMV和T／OMP及病毒MP在烟草中的积累水平比较 | 第87-88页 |
| 2.3 TMV和T／OMP在原生质体中复制水平的比较 | 第88-89页 |
| 2.4 TMV、ToMV和T／OMP对烟草防御相关酶活性的影响 | 第89-90页 |
| 3 讨论 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-94页 |
| 第七章 针对黄瓜花叶病毒不同亚组分离物单克隆抗体的制备与鉴定 | 第94-102页 |
| 1 材料与方法 | 第95-96页 |
| 1.1 毒源 | 第95页 |
| 1.2 免疫 | 第95-96页 |
| 1.3 细胞融合和筛选 | 第96页 |
| 1.4 细胞冻存、复苏及抗体制备 | 第96页 |
| 1.5 腹水抗体性质的测定 | 第96页 |
| 1.6 单抗的特异性鉴定 | 第96页 |
| 2 结果 | 第96-99页 |
| 2.1 杂交瘤细胞的融合、筛选和克隆 | 第96页 |
| 2.2 腹水抗体制备及抗体性质的测定 | 第96-97页 |
| 2.3 Western印迹分析 | 第97-98页 |
| 2.4 CMV腹水单抗的特异性检测 | 第98-99页 |
| 3 讨论 | 第99页 |
| 参考文献 | 第99-102页 |
| 第八章 区分CMV亚组Ⅰ和Ⅱ分离物的TAS-ELISA和免疫捕获RT-PCR快速检测体系的建立 | 第102-118页 |
| 1 材料与方法 | 第103-105页 |
| 1.1 区分CMV亚组Ⅰ和Ⅱ分离物的ELISA检测最适条件的确立 | 第103页 |
| 1.1.1 TAS-ELISA最适条件的测定 | 第103页 |
| 1.1.2 TAS-ELISA和间接ELISA检测效果比较 | 第103页 |
| 1.1.3 TAS-ELISA检测灵敏度的确定 | 第103页 |
| 1.1.4 TAS-ELISA检测田间病样 | 第103页 |
| 1.2 区分CMV亚组Ⅰ和Ⅱ分离物的免疫捕获RT-PCR | 第103-104页 |
| 1.3 序列测定和近全长CP基因的系统进化分析 | 第104-105页 |
| 2 结果 | 第105-115页 |
| 2.1 区分CMV亚组Ⅰ和Ⅱ分离物的TAS-ELISA检测体系的建立 | 第105-108页 |
| 2.1.1 抗体工作浓度的确定 | 第105页 |
| 2.1.2 TAS-ELISA和间接ELISA检测效果的比较 | 第105-106页 |
| 2.1.3 检测灵敏度的确定 | 第106-107页 |
| 2.1.4 田间样品的检测 | 第107-108页 |
| 2.2 区分CMV亚组Ⅰ和Ⅱ分离物的IC-RT-PCR检测体系的建立 | 第108-110页 |
| 2.3 CMV近全长CP基因的系统进化分析 | 第110-115页 |
| 3 讨论 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-118页 |
| 附录A | 第118-119页 |
| 附录B | 第119-123页 |
