| 中文摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-28页 |
| 1 植物耐盐分子机制研究进展 | 第12-13页 |
| 1.1 土壤盐渍化现状 | 第12页 |
| 1.2 植物耐盐分子机制研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2.1 离子的区隔化 | 第12页 |
| 1.2.2 渗透调节 | 第12-13页 |
| 1.2.3 活性氧清除 | 第13页 |
| 1.2.4 盐胁迫相关的转录因子和调控元件 | 第13页 |
| 1.3 展望 | 第13页 |
| 2 基于 EST 的新基因全长 cDNA 克隆策略 | 第13-16页 |
| 2.1 有效ESTs的获得 | 第14页 |
| 2.2 新基因全长cDNA克隆 | 第14-16页 |
| 2.2.1 电子基因克隆 | 第14-15页 |
| 2.2.2 同源序列扩增 | 第15页 |
| 2.2.3 cDNA 末端快速扩增(Rapid amplification of cDNA ends, RACE) | 第15-16页 |
| 2.3 展望 | 第16页 |
| 3 RNA 干扰(RNAi)技术及其在植物中的应用 | 第16-20页 |
| 3.1 RNAi 技术的发现 | 第16-17页 |
| 3.2 RNAi 技术发生的机制 | 第17-18页 |
| 3.3 RNAi 技术在植物中的应用 | 第18-19页 |
| 3.3.1 RNAi 技术在植物功能基因组中的应用 | 第18页 |
| 3.3.2 RNAi 技术在植物抗病性的研究 | 第18-19页 |
| 3.3.3 RNAi 技术在植物品种改良方面的应用 | 第19页 |
| 3.4 展望 | 第19-20页 |
| 4 本研究的目的、意义及拟解决的关键问题 | 第20-21页 |
| 参考文献 | 第21-28页 |
| 第二部分 实验部分 | 第28-67页 |
| 第一章 通过RACE 技术获得目的EST5′端和3′端序列 | 第28-43页 |
| 1 材料与方法 | 第28-35页 |
| 1.1 藜的种植与胁迫处理 | 第28-29页 |
| 1.1.1 藜的种植 | 第28-29页 |
| 1.1.2 藜的胁迫处理 | 第29页 |
| 1.2 主要试剂 | 第29-30页 |
| 1.2.1 琼脂糖凝胶电泳用溶液 | 第29页 |
| 1.2.2 LB 培养基 | 第29页 |
| 1.2.3 试剂 | 第29页 |
| 1.2.4 用于筛选阳性克隆的LB 平板 | 第29-30页 |
| 1.3 方法 | 第30-35页 |
| 1.3.1 总RNA 的提取 | 第30-31页 |
| 1.3.2 RNA 及mRNA 质量鉴定 | 第31页 |
| 1.3.3 TaKaRa 公司5′RACE 试剂盒原理 | 第31-32页 |
| 1.3.4 TaKaRa 公司3′RACE 试剂盒原理 | 第32页 |
| 1.3.5 Clontech 公司RACE 试剂盒原理 | 第32-34页 |
| 1.3.6 PCR 产物纯化 | 第34页 |
| 1.3.7 将回收片段连接至T 载体 | 第34页 |
| 1.3.8 阳性克隆的测序 | 第34页 |
| 1.3.9 全长基因的拼接与比对 | 第34-35页 |
| 2 结果 | 第35-41页 |
| 2.1 靶标 ESTs 序列的筛选 | 第35页 |
| 2.2 藜总RNA 的提取 | 第35-36页 |
| 2.3 TaKaRa RACE 结果 | 第36-37页 |
| 2.4 TaKaRa RACE 测序结果分析 | 第37页 |
| 2.5 Clontech SMART RACE kit RACE 实验结果 | 第37-38页 |
| 2.6 Clontech SMART RACE kit RACE 实验序列拼接结果 | 第38-40页 |
| 2.7 生物信息学分析 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-43页 |
| 第二章 EST05、EST140和EST646全长cDNA的获取 | 第43-53页 |
| 1 材料与方法 | 第43-47页 |
| 1.1 植物材料的种植及胁迫处理 | 第43页 |
| 1.2 主要试剂 | 第43-44页 |
| 1.2.1 琼脂糖凝胶电泳用溶液 | 第43页 |
| 1.2.2 LB 培养基 | 第43-44页 |
| 1.2.3 试剂 | 第44页 |
| 1.3 方法 | 第44-47页 |
| 1.3.1 总RNA 的提取 | 第44页 |
| 1.3.2 RNA 及mRNA 质量鉴定 | 第44页 |
| 1.3.3 DNase I 消化总RNA | 第44-45页 |
| 1.3.4 消化后RNA 的反转录反应 | 第45页 |
| 1.3.5 目的基因的cDNA 全长扩增 | 第45-46页 |
| 1.3.6 PCR 产物纯化 | 第46-47页 |
| 1.3.7 将扩增的长片段连接至T 载体 | 第47页 |
| 1.3.8 阳性克隆的测序 | 第47页 |
| 2 结果 | 第47-51页 |
| 2.1 总RNA 的提取 | 第47-48页 |
| 2.2 EST05 全长基因的扩增 | 第48页 |
| 2.3 EST140 全长基因的扩增 | 第48-49页 |
| 2.4 EST646 全长基因的扩增 | 第49页 |
| 2.5 其他基因全长扩增 | 第49-51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 第三章 P5P(EST05)和TI(EST646)基因植物表达载体与干扰载体构建及遗传转化 | 第53-64页 |
| 1 材料与方法 | 第53-58页 |
| 1.1 材料 | 第53-54页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第53页 |
| 1.1.2 菌种与质粒 | 第53页 |
| 1.1.3 试剂 | 第53页 |
| 1.1.4 培养基 | 第53-54页 |
| 1.2 方法 | 第54-58页 |
| 1.2.1 P5P 和 TI 基因的植物表达载体构建 | 第54页 |
| 1.2.2 植物干扰载体的构建 | 第54-56页 |
| 1.2.3 植物表达载体对农杆菌的转化 | 第56-57页 |
| 1.2.4 拟南芥的种植与转化 | 第57-58页 |
| 1.2.5 转基因植株的筛选 | 第58页 |
| 1.2.6 转基因植株的PCR 检测 | 第58页 |
| 2 结果 | 第58-63页 |
| 2.1 P5P 基因的植物表达载体构建 | 第58页 |
| 2.2 TI 基因植物表达载体构建 | 第58-60页 |
| 2.3 植物干扰载体的构建 | 第60-62页 |
| 2.3.1 内含子的克隆 | 第60-61页 |
| 2.3.2 pCN1301-iP5P 和pCN1301-iTI 干扰载体的构建 | 第61页 |
| 2.3.3 pCN1301-iP5P 和pCN1301-iTI 干扰载体的鉴定 | 第61-62页 |
| 2.4 转基因后代的筛选与检测 | 第62-63页 |
| 3 讨论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-67页 |
| 第三部分 结论 | 第67-68页 |
| 个人简历 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
