| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌简介 | 第11页 |
| 1.2 苏云金芽胞杆菌Cry蛋白的发现、分类及其多样性 | 第11-13页 |
| 1.3 苏云金芽胞杆菌中Cry蛋白晶体的形成 | 第13-15页 |
| 1.3.1 苏云金芽胞杆菌Cry蛋白一级结构与晶体形成的关系 | 第13-14页 |
| 1.3.2 苏云金芽胞杆菌中辅助蛋白与Cry蛋白晶体形成的关系 | 第14-15页 |
| 1.4 苏云金芽胞杆菌中的抗癌蛋白家族Parasporin | 第15-20页 |
| 1.4.1 Parasporin的发现 | 第15-17页 |
| 1.4.2 Parasporin的结构和特性 | 第17-18页 |
| 1.4.3 Parasporin的活性 | 第18-20页 |
| 1.5 苏云金芽胞杆菌中新cry基因的克隆策略 | 第20页 |
| 1.6 研究意义 | 第20-22页 |
| 第二章 Cry51Aa1晶体蛋白一级结构与晶体形成的关系 | 第22-46页 |
| 2.1 材料与方法 | 第22-34页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第22-23页 |
| 2.1.2 主要培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.3 生长条件 | 第24页 |
| 2.1.4 本研究中用到的寡核苷酸引物 | 第24-25页 |
| 2.1.5 试剂和仪器 | 第25-27页 |
| 2.1.6 DNA操作 | 第27-30页 |
| 2.1.7 SOE-PCR | 第30-31页 |
| 2.1.8 重组质粒的转化及转化子的筛选鉴定 | 第31-33页 |
| 2.1.9 晶体蛋白样品的制备、SDS-PAGE | 第33页 |
| 2.1.10 晶体蛋白相对表达量的检测 | 第33-34页 |
| 2.1.11 苏云金芽胞杆菌伴胞晶体的光学显微镜观察 | 第34页 |
| 2.2 结果与分析 | 第34-43页 |
| 2.2.1 Cry51Aa1晶体蛋白的氨基酸序列特点 | 第34页 |
| 2.2.2 Cry51Aa1两端截短突变体的构建 | 第34-37页 |
| 2.2.3 Cry51Aa1两端丙氨酸扫描突变体的构建 | 第37-40页 |
| 2.2.4 Cry51Aa1两端分别截短10个氨基酸后不能形成菱形晶体 | 第40页 |
| 2.2.5 第300-305位氨基酸对菱形晶体的形成不是必须的 | 第40-41页 |
| 2.2.6 第2-10和297-299位氨基酸对菱形晶体形成是必须的 | 第41-43页 |
| 2.2.7 第2-4、5-7位的氨基酸突变为丙氨酸使其蛋白表达量显著降低 | 第43页 |
| 2.3 结论与讨论 | 第43-46页 |
| 第三章 新型杀虫晶体蛋白基因cry65Aa1的克隆 | 第46-61页 |
| 3.1 材料与方法 | 第46-50页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第46页 |
| 3.1.2 主要培养基及生长条件 | 第46-47页 |
| 3.1.3 本研究中用到的寡核苷酸引物 | 第47页 |
| 3.1.4 试剂和仪器 | 第47页 |
| 3.1.5 供试昆虫 | 第47页 |
| 3.1.6 DNA操作 | 第47-48页 |
| 3.1.7 SOE-PCR | 第48页 |
| 3.1.8 重组质粒的转化及转化子的筛选鉴定 | 第48页 |
| 3.1.9 晶体蛋白样品的制备和SDS-PAGE | 第48页 |
| 3.1.10 晶体蛋白的定量 | 第48页 |
| 3.1.11 苏云金芽胞杆菌芽胞的计数 | 第48-49页 |
| 3.1.12 苏云金芽胞杆菌伴胞晶体的光学显微镜观察 | 第49页 |
| 3.1.13 苏云金芽胞杆菌伴胞晶体的扫描电子显微镜观察 | 第49页 |
| 3.1.14 晶体蛋白的毒力测定 | 第49-50页 |
| 3.2 结果与分析 | 第50-60页 |
| 3.2.1 cry65Aa1基因的克隆及序列分析 | 第50-52页 |
| 3.2.2 Cry65Aa1异源表达载体的构建 | 第52-54页 |
| 3.2.3 Cry65Aa1与ORF1共表达能形成蛋白晶体 | 第54-55页 |
| 3.2.4 Cry65Aa1的表达及晶体形成需要ORF1的帮助 | 第55-58页 |
| 3.2.6 Cry65Aa1的毒力测定 | 第58-60页 |
| 3.3 结论与讨论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
