| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-15页 |
| 1.1 朊病毒病概述 | 第10-12页 |
| 1.1.1 感染因子-Prion | 第11-12页 |
| 1.2 朊蛋白的结构和特性 | 第12-13页 |
| 1.2.1 正常蛋白 PrPC | 第12页 |
| 1.2.2 异常蛋白 PrPSc | 第12-13页 |
| 1.3 二硫键概述 | 第13页 |
| 1.4 研究目的、研究意义和研究创新点 | 第13-15页 |
| 第2章 体外形成重组朊蛋白的二硫键 | 第15-22页 |
| 2.1 材料和方法 | 第15-17页 |
| 2.1.1 质粒、菌种及生化试剂 | 第15页 |
| 2.1.2 原核蛋白的表达、纯化与浓缩 | 第15页 |
| 2.1.3 重组蛋白的氧化还原实验 | 第15页 |
| 2.1.4 Western blot 实验 | 第15-16页 |
| 2.1.5 蛋白沉淀实验 | 第16页 |
| 2.1.6 硫磺素 T 实验 | 第16页 |
| 2.1.7 圆二色谱实验 | 第16页 |
| 2.1.8 蛋白酶 K 消化实验 | 第16-17页 |
| 2.1.9 统计方法 | 第17页 |
| 2.2 结果 | 第17-20页 |
| 2.2.1 蛋白沉淀实验显示氧化还原后重组蛋白 PG5 聚集性增强 | 第17页 |
| 2.2.2 硫磺素 T 实验显示氧化还原过程促进了重组蛋白 PG5 的纤维化 | 第17-18页 |
| 2.2.3 圆二色谱法显示氧化还原过程增加了重组蛋白 PG5 二级结构β折叠的含量 | 第18-19页 |
| 2.2.4 氧化还原过程增加了 PG5 的 PK 抗性 | 第19-20页 |
| 2.3 讨论 | 第20-22页 |
| 第3章 基于氧化还原的八肽重复区突变体蛋白 | 第22-28页 |
| 3.1 突变体蛋白纯化 | 第22-23页 |
| 3.1.1 材料和方法 | 第22页 |
| 3.1.2 结果 | 第22-23页 |
| 3.2 沉淀实验 | 第23-24页 |
| 3.3 圆二色谱实验 | 第24-25页 |
| 3.4 硫磺素 T 结合实验 | 第25-26页 |
| 3.5 蛋白酶 K 消化实验 | 第26-27页 |
| 3.6 讨论 | 第27-28页 |
| 第4章 朊蛋白二硫键相关突变体的构建 | 第28-34页 |
| 4.1 材料和方法 | 第29-31页 |
| 4.1.1 质粒、菌种、试剂盒和试剂 | 第29页 |
| 4.1.2 质粒快速小量提取 | 第29页 |
| 4.1.3 快速定点突变 | 第29-31页 |
| 4.1.4 酶切鉴定 | 第31页 |
| 4.2 结果 | 第31-32页 |
| 4.2.1 huPrP-C214G | 第31-32页 |
| 4.2.2 huPrP-C179G/C214G | 第32页 |
| 4.2.3 huPrP-M166C-E221C | 第32页 |
| 4.3 讨论 | 第32-34页 |
| 第5章 细胞培养中的二硫键突变体蛋白 | 第34-35页 |
| 5.1 材料和方法 | 第34页 |
| 5.1.1 细胞转染 | 第34页 |
| 5.2 结果、讨论 | 第34-35页 |
| 第6章 结语 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-41页 |
| 附录 | 第41-46页 |
| 致谢 | 第46页 |
