| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1 前言 | 第11页 |
| 2 miRNA生物合成的多样性 | 第11-15页 |
| 2.1 植物miRNA的形成机制 | 第11-12页 |
| 2.2 miRNA加工过程的可变性及调控机制 | 第12页 |
| 2.3 miRNA~* | 第12-13页 |
| 2.4 miRNA诱导的次级siRNA | 第13-14页 |
| 2.5 miRNA变异体 | 第14-15页 |
| 3 miR396的研究进展 | 第15-17页 |
| 3.1 miR396概述 | 第15页 |
| 3.2 miR396的靶基因 | 第15-16页 |
| 3.3 miR396的功能 | 第16-17页 |
| 4 本研究的内容与意义 | 第17-19页 |
| 第二章 mir396a-1突变体的筛选和表型观察 | 第19-30页 |
| 1 材料和方法 | 第19-24页 |
| 1.1 材料 | 第19页 |
| 1.2 试剂及仪器 | 第19页 |
| 1.3 拟南芥的培养 | 第19-20页 |
| 1.4 CTAB法提取植物基因组DNA | 第20页 |
| 1.5 T-DNA插入突变体的筛选 | 第20-21页 |
| 1.6 miRNA的qRT-PCR检测 | 第21-24页 |
| 1.6.1 RNA加尾 | 第21-22页 |
| 1.6.2 逆转录 | 第22页 |
| 1.6.3 实时定量PCR | 第22-24页 |
| 2 实验结果 | 第24-29页 |
| 2.1 纯合的mir396a-1突变体的筛选 | 第24-26页 |
| 2.2 mir396a-1突变体的分子鉴定 | 第26页 |
| 2.3 mir396a-1突变体的表型观察 | 第26-29页 |
| 3 分析和讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 miR396介导的bHLH74(basic Helix-Loop-Helix transcription factor 74)的抑制在根发育中的功能初探 | 第30-47页 |
| 1 材料和方法 | 第30-38页 |
| 1.1 材料 | 第30页 |
| 1.2 试剂及仪器 | 第30页 |
| 1.3 载体构建 | 第30-34页 |
| 1.3.1 基于Gateway技术的表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 1.3.2 probHLH74：GUS-EGFP载体构建流程 | 第31-32页 |
| 1.3.3 35S：cbHLH74、35S：mbHLH74载体构建流程 | 第32-34页 |
| 1.4 拟南芥转基因 | 第34-35页 |
| 1.5 逆转录反应 | 第35-36页 |
| 1.5.1 RNA样品中去除基因组DNA | 第35页 |
| 1.5.2 逆转录反应 | 第35-36页 |
| 1.6 靶基因的qRT-PCR检测 | 第36-37页 |
| 1.7 GUS蛋白的组织化学染色 | 第37-38页 |
| 2 实验结果 | 第38-45页 |
| 2.1 bHLH74(AT1G10120)在拟南芥根中的表达模式 | 第38-40页 |
| 2.2 35S：mbHLH74转基因株系的鉴定及表型 | 第40-41页 |
| 2.3 bhlh74-1突变体的鉴定及表型观察 | 第41-43页 |
| 2.4 miR396介导的bHLH74的调控对根生长的影响 | 第43-45页 |
| 3 分析和讨论 | 第45-47页 |
| 3.1 bHLH74参与拟南芥根生长的调控 | 第45-46页 |
| 3.2 miR396通过介导bHLH74的抑制来调控根的生长 | 第46-47页 |
| 第四章 不同MIR396基因座产生的sRNA分析 | 第47-68页 |
| 1 材料和方法 | 第47-50页 |
| 1.1 材料 | 第47页 |
| 1.2 试剂和仪器 | 第47页 |
| 1.3 烟草瞬时转化 | 第47-49页 |
| 1.3.1 农杆菌浸润烟草叶片 | 第47-48页 |
| 1.3.2 提取烟草RNA | 第48页 |
| 1.3.3 去除基因组DNA及逆转录反应 | 第48页 |
| 1.3.4 靶基因的RT-PCR检测 | 第48-49页 |
| 1.4 miR396家族过表达株系的sRNA测序分析 | 第49-50页 |
| 1.4.1 拟南芥幼苗培养 | 第49页 |
| 1.4.2 拟南芥RNA的提取 | 第49页 |
| 1.4.3 测序分析 | 第49-50页 |
| 2 实验结果 | 第50-66页 |
| 2.1 small RNA数据库分析 | 第50-51页 |
| 2.2 测序数据分析 | 第51-62页 |
| 2.3 其它sRNA对靶基因作用效率的影响 | 第62-64页 |
| 2.4 过表达miR396a和miR396b对其它miRNA的影响 | 第64-66页 |
| 3 分析和讨论 | 第66-68页 |
| 3.1 次生siRNA的功能 | 第66页 |
| 3.2 其它miRNA参与根生长的调控 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
