| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第9-24页 |
| 1.1 乳酸乳球菌的研究现状 | 第9-20页 |
| 1.1.1 乳酸乳球菌的基因工程研究进展 | 第10-13页 |
| 1.1.2 抗药性基因转移问题 | 第13-14页 |
| 1.1.3 乳球菌的食品级标记 | 第14-18页 |
| 1.1.4 以 thyA 基因为标记的染色体-质粒互补系统 | 第18-20页 |
| 1.2 纳豆激酶的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.2.1 纳豆激酶的特性及功能 | 第20-21页 |
| 1.2.2 纳豆激酶的分子生物学研究进展 | 第21页 |
| 1.3 本研究的目的、意义、技术路线 | 第21-24页 |
| 1.3.1 技术路线 | 第22-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-43页 |
| 2.1 菌种和质粒 | 第24页 |
| 2.2 培养基 | 第24-26页 |
| 2.3 生化试剂 | 第26-27页 |
| 2.3.1 主要生化试剂 | 第26页 |
| 2.3.2 主要分子生物学试剂 | 第26-27页 |
| 2.4 主要仪器设备 | 第27页 |
| 2.5 主要试剂及药品的配制 | 第27-28页 |
| 2.6 引物设计 | 第28-29页 |
| 2.7 试验方法 | 第29-43页 |
| 2.7.1 利用大肠杆菌内源性插入序列 IS1 构建 thyA 缺陷型克隆宿主 | 第29-33页 |
| 2.7.2 嗜热链球菌 thyA 全基因的克隆 | 第33-35页 |
| 2.7.3 以质粒 pMG36e 为基础的、以 thyA 基因为标记的无抗性表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 2.7.4 重组质粒 pMGthyA 的验证 | 第36-37页 |
| 2.7.5 表达载体 pMGthyA 电转化 thyA 缺陷型乳酸乳球菌 MG1363-TT | 第37-38页 |
| 2.7.6 报告基因 amy 的克隆及表达 | 第38-40页 |
| 2.7.7 纳豆激酶基因的克隆 | 第40-42页 |
| 2.7.8 含纳豆激酶基因的无抗表达载体的构建 | 第42页 |
| 2.7.9 含纳豆激酶基因的无抗载体的转化乳酸乳球菌 MG1363-TT | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-61页 |
| 3.1 利用大肠杆菌内源性插入序列 IS1 构建 thyA 缺陷型菌株 | 第43-47页 |
| 3.1.1 TMP 浓度对大肠杆菌 DH5α的生长影响 | 第43页 |
| 3.1.2 thyA 缺陷型克隆宿主菌株的筛选及突变基因的分析 | 第43-47页 |
| 3.2 嗜热链球菌 thyA 全基因的克隆 | 第47-50页 |
| 3.2.1 嗜热链球菌 St-JY 基因组的提取 | 第47-48页 |
| 3.2.2 嗜热链球菌 St-JY 的 thyA 全基因的扩增 | 第48页 |
| 3.2.3 重组质粒 pMDSt-thyA 的构建 | 第48-50页 |
| 3.3 乳酸乳球菌无抗性表达载体 pMGthyA 的构建 | 第50-54页 |
| 3.3.1 质粒 pMG36e 与的提取 | 第51-52页 |
| 3.3.2 质粒 pMG36e 分步双酶切 | 第52页 |
| 3.3.3 重组质粒 pMGthyA 的验证 | 第52-53页 |
| 3.3.4 重组质粒 pMGthyA 电转化 thyA 缺陷型乳酸乳球菌 MG1363-TT | 第53-54页 |
| 3.4 报告基因 amy 的表达 | 第54-57页 |
| 3.5 纳豆激酶基因的克隆 | 第57-61页 |
| 3.5.1 纳豆芽孢杆菌基因组的提取 | 第57页 |
| 3.5.2 PCR 扩增纳豆激酶基因 | 第57-59页 |
| 3.5.3 含纳豆激酶基因的表达载体的构建 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-67页 |
| 4.1 利用大肠杆菌内源性插入序列 IS1 构建 thyA 缺陷型菌株 | 第61-62页 |
| 4.2 以嗜热链球菌 thyA 基因为标记的无抗表达载体的构建 | 第62-64页 |
| 4.3 报告基因 amy 的表达 | 第64页 |
| 4.4 thyA 为标记的染色体-质粒互补表达系统的分析 | 第64-65页 |
| 4.5 纳豆激酶的克隆 | 第65-67页 |
| 5 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 在校期间发表的学术论文 | 第76-77页 |
| 作者简介 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
