摘要 | 第3-4页 |
Abstract | 第4页 |
英文缩略词表 | 第5-9页 |
第一章 引言 | 第9-21页 |
1.1 特发性肺纤维化 | 第9-11页 |
1.1.1 肺纤维化疾病的概述 | 第9页 |
1.1.2 肺纤维化治疗策略 | 第9-11页 |
1.2 AECⅡ细胞与肺纤维化 | 第11-12页 |
1.3 EMT过程与肺纤维化 | 第12-13页 |
1.4 细胞因子与肺纤维化的关系 | 第13-17页 |
1.4.1 FGF信号的概述及与肺纤维化的关系 | 第13-15页 |
1.4.2 TGF-β 的概述及与肺纤维化的关系 | 第15-16页 |
1.4.3 CTGF的概述及与肺纤维化的关系 | 第16-17页 |
1.5 msFGFR2c | 第17-19页 |
1.5.1 msFGFR2c概述 | 第17-18页 |
1.5.2 msFGFR2Ⅲc作为治疗肺纤维化药物的优越性 | 第18-19页 |
1.6 研究目的及意义 | 第19-20页 |
1.7 研究路线 | 第20-21页 |
第二章 实验材料和仪器 | 第21-27页 |
2.1 实验材料 | 第21-22页 |
2.1.1 细胞株 | 第21页 |
2.1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
2.2 常用溶液及配方 | 第22-25页 |
2.3 仪器与设备 | 第25-27页 |
第三章 实验方法 | 第27-40页 |
3.1 细胞培养 | 第27-28页 |
3.1.1 细胞复苏 | 第27页 |
3.1.2 细胞传代 | 第27页 |
3.1.3 细胞冻存 | 第27-28页 |
3.2 体外细胞侵袭(Trans-well)法检测AECⅡ细胞的迁移 | 第28页 |
3.3 酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测AECⅡ细胞表达TGF-β 和FGF-2 | 第28-29页 |
3.4 免疫印迹(Western-Blot)检测 α-SMA及相关信号分子的表达 | 第29-31页 |
3.4.1 AECⅡ细胞总蛋白的抽提 | 第29页 |
3.4.2 BCA法测定总蛋白含量 | 第29-30页 |
3.4.3 SDS-PAGE分离蛋白 | 第30页 |
3.4.4 转膜 | 第30页 |
3.4.5 BSA封闭 | 第30页 |
3.4.6 孵育一抗 | 第30-31页 |
3.4.7 孵育二抗 | 第31页 |
3.4.8 显影和曝光 | 第31页 |
3.5 实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测 | 第31-34页 |
3.5.1 诱导细胞 | 第31页 |
3.5.2 Trizol法提取细胞总RNA | 第31-32页 |
3.5.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
3.5.4 RNA逆转录合成cDNA | 第32-33页 |
3.5.5 RT-PCR | 第33-34页 |
3.5.6 数据分析方法 | 第34页 |
3.6 在体水平研究msFGFR2c对肺纤维化的作用及机制 | 第34-39页 |
3.6.1 博莱霉素(BLM)诱导C57BL/6 小鼠肺纤维化模型的建立 | 第34-35页 |
3.6.2 小鼠体重以及肺系数测量 | 第35页 |
3.6.3 肺组织病理切片的制备 | 第35-36页 |
3.6.4 苏木素伊红(HE)染色 | 第36页 |
3.6.5 Massion染色 | 第36-37页 |
3.6.6 组织免疫组化 | 第37-38页 |
3.6.7 组织免疫荧光 | 第38-39页 |
3.7 统计学方法 | 第39-40页 |
第四章 结果 | 第40-54页 |
4.1 MRC-5 细胞培养基对肺纤维化过程的作用 | 第40-43页 |
4.1.1 MRC-5 细胞培养基诱导AECⅡ细胞发生EMT过程 | 第40页 |
4.1.2 MRC-5 细胞培养基诱导AECⅡ细胞表达CTGF | 第40-41页 |
4.1.3 MRC-5 细胞培养基诱导AECⅡ细胞表达 α-SMA | 第41-42页 |
4.1.4 Anti-CTGF和msFGFR2c抑制AECⅡ细胞迁移 | 第42页 |
4.1.5 MRC-5 细胞条件性培养基中FGF-2 和TGF-β1 含量的检测 | 第42-43页 |
4.2 TGF-β 及FGF-2 对肺纤维化过程的作用 | 第43-50页 |
4.2.1 FGF-2 及TGF-β 可以促进AECⅡ细胞的迁移 | 第43-44页 |
4.2.2 TGF-β 诱导AECⅡ细胞表达CTGF | 第44页 |
4.2.3 TGF-β 诱导AECⅡ细胞表达 α-SMA并被Anti-CTGF抑制 | 第44-45页 |
4.2.4 TGF-β 诱导AECⅡ细胞释放FGF-2 | 第45-46页 |
4.2.5 RT-PCR检测TGF-β 和CTGF诱导AECⅡ细胞后FGFR亚型的表达变化 | 第46-47页 |
4.2.6 msFGFR2c抑制TGF-β 诱导的 α-SMA表达 | 第47-48页 |
4.2.7 msFGFR2c抑制FGF-2 诱导的CTGF及N-Cadherin的表达 | 第48-50页 |
4.3 体内水平研究msFGFR2c对肺纤维化的作用 | 第50-53页 |
4.3.1 BLM诱导肺纤维化模型小鼠体重的检测 | 第50页 |
4.3.2 HE、Massion染色 | 第50-51页 |
4.3.3 Western-blot检测小鼠肺组织中 α-SMA和pro-SPC表达 | 第51-52页 |
4.3.4 免疫荧光检测 α-SMA和pro-SPC在小鼠肺组织中的表达 | 第52-53页 |
小结 | 第53-54页 |
第五章 总结与展望 | 第54-56页 |
5.1 总结 | 第54-55页 |
5.2 讨论 | 第55页 |
5.3 展望 | 第55-56页 |
参考文献 | 第56-63页 |
致谢 | 第63页 |