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大鼠原代AECⅡ细胞中突变型FGF受体胞外段抑制肺纤维化的机制研究

摘要第3-4页
Abstract第4页
英文缩略词表第5-9页
第一章 引言第9-21页
    1.1 特发性肺纤维化第9-11页
        1.1.1 肺纤维化疾病的概述第9页
        1.1.2 肺纤维化治疗策略第9-11页
    1.2 AECⅡ细胞与肺纤维化第11-12页
    1.3 EMT过程与肺纤维化第12-13页
    1.4 细胞因子与肺纤维化的关系第13-17页
        1.4.1 FGF信号的概述及与肺纤维化的关系第13-15页
        1.4.2 TGF-β 的概述及与肺纤维化的关系第15-16页
        1.4.3 CTGF的概述及与肺纤维化的关系第16-17页
    1.5 msFGFR2c第17-19页
        1.5.1 msFGFR2c概述第17-18页
        1.5.2 msFGFR2Ⅲc作为治疗肺纤维化药物的优越性第18-19页
    1.6 研究目的及意义第19-20页
    1.7 研究路线第20-21页
第二章 实验材料和仪器第21-27页
    2.1 实验材料第21-22页
        2.1.1 细胞株第21页
        2.1.2 主要试剂第21-22页
    2.2 常用溶液及配方第22-25页
    2.3 仪器与设备第25-27页
第三章 实验方法第27-40页
    3.1 细胞培养第27-28页
        3.1.1 细胞复苏第27页
        3.1.2 细胞传代第27页
        3.1.3 细胞冻存第27-28页
    3.2 体外细胞侵袭(Trans-well)法检测AECⅡ细胞的迁移第28页
    3.3 酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测AECⅡ细胞表达TGF-β 和FGF-2第28-29页
    3.4 免疫印迹(Western-Blot)检测 α-SMA及相关信号分子的表达第29-31页
        3.4.1 AECⅡ细胞总蛋白的抽提第29页
        3.4.2 BCA法测定总蛋白含量第29-30页
        3.4.3 SDS-PAGE分离蛋白第30页
        3.4.4 转膜第30页
        3.4.5 BSA封闭第30页
        3.4.6 孵育一抗第30-31页
        3.4.7 孵育二抗第31页
        3.4.8 显影和曝光第31页
    3.5 实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测第31-34页
        3.5.1 诱导细胞第31页
        3.5.2 Trizol法提取细胞总RNA第31-32页
        3.5.3 琼脂糖凝胶电泳第32页
        3.5.4 RNA逆转录合成cDNA第32-33页
        3.5.5 RT-PCR第33-34页
        3.5.6 数据分析方法第34页
    3.6 在体水平研究msFGFR2c对肺纤维化的作用及机制第34-39页
        3.6.1 博莱霉素(BLM)诱导C57BL/6 小鼠肺纤维化模型的建立第34-35页
        3.6.2 小鼠体重以及肺系数测量第35页
        3.6.3 肺组织病理切片的制备第35-36页
        3.6.4 苏木素伊红(HE)染色第36页
        3.6.5 Massion染色第36-37页
        3.6.6 组织免疫组化第37-38页
        3.6.7 组织免疫荧光第38-39页
    3.7 统计学方法第39-40页
第四章 结果第40-54页
    4.1 MRC-5 细胞培养基对肺纤维化过程的作用第40-43页
        4.1.1 MRC-5 细胞培养基诱导AECⅡ细胞发生EMT过程第40页
        4.1.2 MRC-5 细胞培养基诱导AECⅡ细胞表达CTGF第40-41页
        4.1.3 MRC-5 细胞培养基诱导AECⅡ细胞表达 α-SMA第41-42页
        4.1.4 Anti-CTGF和msFGFR2c抑制AECⅡ细胞迁移第42页
        4.1.5 MRC-5 细胞条件性培养基中FGF-2 和TGF-β1 含量的检测第42-43页
    4.2 TGF-β 及FGF-2 对肺纤维化过程的作用第43-50页
        4.2.1 FGF-2 及TGF-β 可以促进AECⅡ细胞的迁移第43-44页
        4.2.2 TGF-β 诱导AECⅡ细胞表达CTGF第44页
        4.2.3 TGF-β 诱导AECⅡ细胞表达 α-SMA并被Anti-CTGF抑制第44-45页
        4.2.4 TGF-β 诱导AECⅡ细胞释放FGF-2第45-46页
        4.2.5 RT-PCR检测TGF-β 和CTGF诱导AECⅡ细胞后FGFR亚型的表达变化第46-47页
        4.2.6 msFGFR2c抑制TGF-β 诱导的 α-SMA表达第47-48页
        4.2.7 msFGFR2c抑制FGF-2 诱导的CTGF及N-Cadherin的表达第48-50页
    4.3 体内水平研究msFGFR2c对肺纤维化的作用第50-53页
        4.3.1 BLM诱导肺纤维化模型小鼠体重的检测第50页
        4.3.2 HE、Massion染色第50-51页
        4.3.3 Western-blot检测小鼠肺组织中 α-SMA和pro-SPC表达第51-52页
        4.3.4 免疫荧光检测 α-SMA和pro-SPC在小鼠肺组织中的表达第52-53页
    小结第53-54页
第五章 总结与展望第54-56页
    5.1 总结第54-55页
    5.2 讨论第55页
    5.3 展望第55-56页
参考文献第56-63页
致谢第63页

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