| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 中英文缩略词表 | 第11-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-16页 |
| 1.1 sPLA_2是蛇毒关键毒素组分 | 第12-14页 |
| 1.2 sPLA_2特异性蛇源抑制剂 | 第14页 |
| 1.3 本文研究意义 | 第14-16页 |
| 第2章 中华水蛇血清PLIγ 的广谱抗蛇毒作用 | 第16-25页 |
| 2.1 实验材料及仪器 | 第16-17页 |
| 2.1.1 材料 | 第16页 |
| 2.1.2 试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第16-17页 |
| 2.1.4 主要溶液的配置 | 第17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-19页 |
| 2.2.1 蛇毒和中华水蛇血清蛋白定量 | 第17-18页 |
| 2.2.2 琼脂糖平板测定蛋白活性 | 第18页 |
| 2.2.3 中华水蛇PLIγ 抑制蛇毒出血毒 | 第18-19页 |
| 2.3 实验结果 | 第19-23页 |
| 2.3.1 BCA蛋白定量 | 第19页 |
| 2.3.2 琼脂糖活性平板实验 | 第19-21页 |
| 2.3.3 小鼠出血毒实验 | 第21-23页 |
| 2.4 讨论 | 第23-25页 |
| 第3章 酵母表达质粒pPICZαA-PLIγ 的构建 | 第25-36页 |
| 3.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第26页 |
| 3.1.2 引物 | 第26页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第26页 |
| 3.1.4 主要仪器和设备 | 第26-27页 |
| 3.1.5 溶液配制 | 第27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-32页 |
| 3.2.1 pET28c(+)-PLIγ 质粒的制备 | 第27-28页 |
| 3.2.2 中华水蛇PLIγ 基因克隆 | 第28-30页 |
| 3.2.3 构建重组质粒pPICZαA-PLIγ | 第30-31页 |
| 3.2.4 重组质粒转化 | 第31-32页 |
| 3.2.5 重组质粒的鉴定 | 第32页 |
| 3.2.6 DNA测序 | 第32页 |
| 3.3 结果 | 第32-35页 |
| 3.3.1 PLIγ 基因的扩增 | 第32-33页 |
| 3.3.2 重组质粒pPICZαA-PLIγ 双酶切与PCR鉴定 | 第33-34页 |
| 3.3.3 重组质粒的测序结果 | 第34-35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-36页 |
| 第4章 中华水蛇PLIγ 诱导表达、纯化及活性检测 | 第36-53页 |
| 4.1 实验材料 | 第36-40页 |
| 4.1.1 菌株 | 第36页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第36-37页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第37页 |
| 4.1.4 溶液的配置 | 第37-40页 |
| 4.2 实验方法 | 第40-46页 |
| 4.2.1 重组质粒转化毕赤酵母GS115 | 第40-41页 |
| 4.2.2 酵母表达重组子筛选 | 第41-42页 |
| 4.2.3 酵母阳性克隆诱导表达 | 第42页 |
| 4.2.4 酵母表达产物检测 | 第42-44页 |
| 4.2.5 蛋白的分离纯化 | 第44-45页 |
| 4.2.6 琼脂糖平板测定蛋白活性 | 第45-46页 |
| 4.2.7 PLIγ 抗五步蛇毒致小鼠出血毒性的测定 | 第46页 |
| 4.3 结果 | 第46-51页 |
| 4.3.1 重组质粒的线性化 | 第46-47页 |
| 4.3.2 重组酵母基因组DNA的提取 | 第47页 |
| 4.3.3 重组酵母的PCR鉴定 | 第47-48页 |
| 4.3.4 western bolt结果 | 第48页 |
| 4.3.5 亲和层析纯化PLIγ | 第48-49页 |
| 4.3.6 琼脂糖平板测定蛋白活性 | 第49-50页 |
| 4.3.7 PLIγ 抗五步蛇毒出血毒作用 | 第50-51页 |
| 4.4 讨论 | 第51-53页 |
| 第5章 结论与展望 | 第53-54页 |
| 5.1 结论 | 第53页 |
| 5.2 进一步的研究计划 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第60-61页 |
| 综述 | 第61-70页 |
| 参考文献 | 第67-70页 |
