| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第11-18页 |
| 1.1 旋毛虫病及旋毛虫生活史 | 第11页 |
| 1.2 谷氨酸脱羧酶概况 | 第11-13页 |
| 1.2.1 GAD的来源及用途 | 第11-12页 |
| 1.2.2 GAD的酶学性质 | 第12页 |
| 1.2.3 GAD的分子生物学研究 | 第12-13页 |
| 1.2.4 GAD酶活力的测定 | 第13页 |
| 1.3 γ-氨基丁酸（GABA） | 第13页 |
| 1.3.1 GABA理化性质及应用 | 第13页 |
| 1.3.2 GABA的制备 | 第13页 |
| 1.4 常见胃肠道致病菌抗酸机制的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.4.1 大肠杆菌的抗酸机制 | 第14-15页 |
| 1.4.2 沙门氏菌的抗酸机制 | 第15-16页 |
| 1.4.3 志贺式杆菌的抗酸机制 | 第16页 |
| 1.4.4 弧菌的抗酸机制 | 第16页 |
| 1.4.5 乳酸乳球菌的抗酸机制 | 第16-17页 |
| 1.4.6 单增李斯特菌的抗酸机制 | 第17页 |
| 1.5 研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-29页 |
| 2.1 材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 虫株 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第18-19页 |
| 2.1.4 主要应用软件 | 第19页 |
| 2.2 方法 | 第19-29页 |
| 2.2.1 旋毛虫肌幼虫的收集 | 第19页 |
| 2.2.2 引物设计与合成 | 第19页 |
| 2.2.3 总RNA的提取 | 第19页 |
| 2.2.4 逆转录 | 第19-20页 |
| 2.2.5 TsGAD基因的克隆 | 第20-22页 |
| 2.2.6 重组表达质粒的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.7 TsGAD重组蛋白的诱导表达 | 第23-24页 |
| 2.2.8 比色法测定酶活性 | 第24页 |
| 2.2.9 TsGAD蛋白的抗原性检测 | 第24-25页 |
| 2.2.10 TsGAD蛋白荧光免疫定位 | 第25-26页 |
| 2.2.11 pH对旋毛虫肌幼虫TsGAD mRNA表达水平的影响 | 第26-28页 |
| 2.2.12 肌幼虫体外存活率的检测 | 第28-29页 |
| 3 结果 | 第29-41页 |
| 3.1 TsGAD基因克隆结果 | 第29页 |
| 3.1.1 旋毛虫肌幼虫TsGAD扩增 | 第29页 |
| 3.1.2 重组克隆质粒p MD18-T-Ts GAD的鉴定 | 第29页 |
| 3.2 诱导表达结果 | 第29-32页 |
| 3.2.1 重组质粒pET-30a-Ts GAD的鉴定 | 第29-30页 |
| 3.2.2 重组蛋白表达时相及可溶性分析 | 第30-31页 |
| 3.2.3 pET-30a-GAD重组蛋白诱导条件的优化 | 第31-32页 |
| 3.3 TsGAD酶活性的检测 | 第32-33页 |
| 3.4 多克隆抗体效价的测定 | 第33页 |
| 3.5 重组蛋白Western Blot检测结果 | 第33-34页 |
| 3.6 TsGAD蛋白荧光免疫定位 | 第34页 |
| 3.7 不同pH对旋毛虫肌幼虫TsGAD mRNA表达水平的影响 | 第34-41页 |
| 3.7.1 RT-TsGAD基因和内参RT-Ts GAPDH基因片段的扩增 | 第34页 |
| 3.7.2 标准品的构建 | 第34-36页 |
| 3.7.3 RT-TsGAD、RT-TsGAPDH荧光定量PCR检测方法的建立 | 第36-38页 |
| 3.7.4 pH对TsGAD mRNA表达水平的影响 | 第38页 |
| 3.7.5 培养时间对TsGAD mRNA表达水平的影响 | 第38页 |
| 3.7.6 肌幼虫存活率的检测 | 第38-41页 |
| 4 讨论 | 第41-44页 |
| 4.1 TsGAD基因的原核表达 | 第41页 |
| 4.2 TsGAD酶活性的测定及免疫相关性的分析 | 第41页 |
| 4.3 不同pH对旋毛虫肌幼虫TsGAD mRNA表达水平的影响 | 第41-43页 |
| 4.4 本实验的创新之处 | 第43-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第51页 |
