摘要 | 第9-11页 |
Abstract | 第11-12页 |
第一章 绪论 | 第13-28页 |
第一节 选题背景与研究意义 | 第13-15页 |
第二节 国内外研究进展 | 第15-25页 |
一、植物miR172 及其靶基因功能的研究进展 | 第15-21页 |
(一) miR172 及其靶基因调控植物开花 | 第15-16页 |
(二) miR172 及其靶基因调控植物的生长发育 | 第16-20页 |
(三) 植物miRNA靶基因的识别和鉴定 | 第20-21页 |
二、大豆生育期基因的研究进展 | 第21-23页 |
(一) 大豆生育期的划分 | 第21页 |
(二) 大豆主要生育期基因的研究现状 | 第21-23页 |
三、光周期开花途径的研究进展 | 第23-25页 |
第三节 研究内容与技术路线 | 第25-28页 |
一、研究内容 | 第25-26页 |
(一) 大豆miR172 靶基因的识别和鉴定 | 第25页 |
(二) 大豆miR172 及其靶基因的表达模式分析 | 第25-26页 |
(三) 大豆miR172 及其靶基因的功能研究 | 第26页 |
(四) 大豆miR172 及其靶基因参与的光周期调控开花途径研究 | 第26页 |
二、技术路线 | 第26-28页 |
第二章 大豆miR172 靶基因的识别和鉴定 | 第28-46页 |
第一节 材料与方法 | 第28-34页 |
一、大豆材料 | 第28页 |
(一) 用于获得GmTOEs候选基因的大豆材料 | 第28页 |
(二) 用于miR172 靶基因鉴定的大豆材料 | 第28页 |
二、试验方法 | 第28-34页 |
(一) 大豆中GmTOEs候选基因的获得 | 第28-29页 |
(二) GmTOEs的聚类分析 | 第29页 |
(三) miR172 靶基因的预测 | 第29页 |
(四) miR172 靶基因的鉴定 | 第29-34页 |
第二节 结果与分析 | 第34-46页 |
一、大豆中GmTOEs候选基因的获得 | 第34-39页 |
(一) 筛选拟南芥TOE的同源基因 | 第34-36页 |
(二) GmTOEs的聚类分析 | 第36-37页 |
(三) 不同光照处理对GmTOEs候选基因的影响 | 第37-39页 |
二、大豆中miR172 靶基因的预测 | 第39-41页 |
(一) 软件预测大豆中miR172 的靶基因 | 第39-40页 |
(二) GmTOEs蛋白保守结构域比对 | 第40-41页 |
三、大豆中miR172 靶基因的鉴定 | 第41-46页 |
(一) 5’-RACE实验原理及流程 | 第41-42页 |
(二) 大豆miR172 对其靶基因切割位点分析 | 第42-46页 |
第三章 大豆miR172 及其靶基因的表达模式分析 | 第46-60页 |
第一节 材料与方法 | 第46-53页 |
一、大豆材料 | 第46页 |
二、试验方法 | 第46-53页 |
(一) 取材方法 | 第46-47页 |
(二) 大豆Total RNA的提取 | 第47页 |
(三) mRNA的反转录 | 第47-48页 |
(四) 半定量PCR | 第48页 |
(五) 实时荧光定量PCR(Real time-PCR) | 第48-50页 |
(六) microRNA的检测 | 第50-53页 |
第二节 结果与分析 | 第53-60页 |
一、mi R172 及其靶基因GmTOEs的组织特异性表达模式 | 第53-54页 |
二、mi R172 及其靶基因GmTOEs的时间调控表达模式 | 第54-58页 |
(一) 短日照条件下miR172 及其靶基因的时间调控表达模式 | 第54-56页 |
(二) 长日照条件下miR172 及其靶基因的时间调控表达模式 | 第56-58页 |
三、mi R172 及其靶基因GmTOEs的昼夜节律表达 | 第58-60页 |
第四章 大豆miR172 及其靶基因的功能研究 | 第60-84页 |
第一节材料与方法 | 第60-70页 |
一、试验材料 | 第60-61页 |
(一) 大豆材料 | 第60页 |
(二) 菌株 | 第60页 |
(三) 质粒 | 第60页 |
(四) 相关培养基 | 第60-61页 |
(五) 试剂 | 第61页 |
二、试验方法 | 第61-70页 |
(一) DNA的提取(CTAB法) | 第61-62页 |
(二) 总RNA的提取 | 第62页 |
(三) 克隆引物设计 | 第62-63页 |
(四) TA克隆载体的构建 | 第63-67页 |
(五) 植物表达载体的构建 | 第67-68页 |
(六) 大豆的遗传转化(根癌农杆菌介导的大豆子叶节转化法) | 第68-70页 |
(七) 大豆转基因后代的鉴定 | 第70页 |
(八) 大豆转基因后代的表型观察 | 第70页 |
第二节 结果与分析 | 第70-84页 |
一、大豆miR172 和GmTOE4a基因的克隆 | 第70-75页 |
(一) 大豆miR172 的克隆 | 第70-72页 |
(二) 大豆miR172 靶基因GmTOE4a的克隆 | 第72-75页 |
二、大豆转基因植株的鉴定与获得 | 第75-76页 |
(一) 除草剂的抗性检测 | 第75页 |
(二) 分子检测 | 第75-76页 |
三、大豆转基因植株的表型 | 第76-84页 |
(一) miR172 转基因大豆的表型 | 第77-79页 |
(二) GmTOE4a转基因大豆的表型 | 第79-84页 |
第五章 大豆miR172 及其靶基因参与的光周期调控开花途径研究 | 第84-105页 |
第一节 材料与方法 | 第84-86页 |
一、大豆材料 | 第84-85页 |
(一) E1-E4 近等基因系材料 | 第84页 |
(二) 转基因材料 | 第84-85页 |
二、试验方法 | 第85-86页 |
(一) 取材方法 | 第85页 |
(二) 大豆Total RNA的提取 | 第85-86页 |
(三) mRNA的反转录 | 第86页 |
(四) 实时荧光定量PCR(Real time-PCR) | 第86页 |
(五) microRNA的检测 | 第86页 |
第二节 结果与分析 | 第86-104页 |
一、mi R172 与其靶基因GmTOEs的调控关系 | 第86-89页 |
(一) miR172c主要在叶片中对其靶基因GmTOE4a起抑制作用 | 第86-87页 |
(二) GmTOE4a过表达促进同家族基因的表达 | 第87-88页 |
(三) GmTOE4a基因反馈调控miR172 | 第88-89页 |
二、mi R172 及其靶基因与生育期基因E3/E4 的调控关系 | 第89-91页 |
三、mi R172 及其靶基因与生育期基因E2 的调控关系 | 第91-93页 |
四、mi R172 及其靶基因与生育期基因E1 的调控关系 | 第93-95页 |
(一) E1 调控miR172 和GmTOE4a的表达 | 第93-94页 |
(二) miR172 负反馈调控E1 | 第94-95页 |
五、mi R172 及其靶基因与大豆成花相关基因的调控关系 | 第95-99页 |
(一) miR172c诱导大豆成花相关基因的表达 | 第96-97页 |
(二) GmTOE4a抑制大豆成花相关基因的表达 | 第97-99页 |
六、mi R172 及其靶基因与GmCOLs的调控关系 | 第99-101页 |
七、mi R172 及其靶基因与mi R156/GmSPLs的调控关系 | 第101-104页 |
(一) GmTOE4a调控miR156 及其靶基因GmSPL3/9 | 第101-102页 |
(二) miR156 调控miR172 及其靶基因GmTOEs | 第102-104页 |
第三节 小结 | 第104-105页 |
第六章 讨论 | 第105-109页 |
一、大豆中的TOE同源基因 | 第105-106页 |
二、大豆生育期基因E1/E3/E4对 miR172及其靶基因的调控 | 第106-107页 |
三、大豆miR172及其靶基因调控的光周期开花途径不同于拟南芥 | 第107页 |
四、GmTOE4a调控大豆植株形态 | 第107-109页 |
第七章 全文结论 | 第109-111页 |
一、获得3个miR172的靶基因 | 第109页 |
二、分析了miR172及其靶基因GmTOEs的表达模式 | 第109页 |
三、验证了大豆miR172 的功能 | 第109-110页 |
四、验证了大豆GmTOE4a的功能 | 第110页 |
五、揭示了mi R172及其靶基因参与的大豆光周期调控开花途径 | 第110-111页 |
参考文献 | 第111-119页 |
附表 | 第119-121页 |
发表文章 | 第121-122页 |
致谢 | 第122页 |