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miR172及其靶基因在大豆光周期调控开花中的功能研究

摘要第9-11页
Abstract第11-12页
第一章 绪论第13-28页
    第一节 选题背景与研究意义第13-15页
    第二节 国内外研究进展第15-25页
        一、植物miR172 及其靶基因功能的研究进展第15-21页
            (一) miR172 及其靶基因调控植物开花第15-16页
            (二) miR172 及其靶基因调控植物的生长发育第16-20页
            (三) 植物miRNA靶基因的识别和鉴定第20-21页
        二、大豆生育期基因的研究进展第21-23页
            (一) 大豆生育期的划分第21页
            (二) 大豆主要生育期基因的研究现状第21-23页
        三、光周期开花途径的研究进展第23-25页
    第三节 研究内容与技术路线第25-28页
        一、研究内容第25-26页
            (一) 大豆miR172 靶基因的识别和鉴定第25页
            (二) 大豆miR172 及其靶基因的表达模式分析第25-26页
            (三) 大豆miR172 及其靶基因的功能研究第26页
            (四) 大豆miR172 及其靶基因参与的光周期调控开花途径研究第26页
        二、技术路线第26-28页
第二章 大豆miR172 靶基因的识别和鉴定第28-46页
    第一节 材料与方法第28-34页
        一、大豆材料第28页
            (一) 用于获得GmTOEs候选基因的大豆材料第28页
            (二) 用于miR172 靶基因鉴定的大豆材料第28页
        二、试验方法第28-34页
            (一) 大豆中GmTOEs候选基因的获得第28-29页
            (二) GmTOEs的聚类分析第29页
            (三) miR172 靶基因的预测第29页
            (四) miR172 靶基因的鉴定第29-34页
    第二节 结果与分析第34-46页
        一、大豆中GmTOEs候选基因的获得第34-39页
            (一) 筛选拟南芥TOE的同源基因第34-36页
            (二) GmTOEs的聚类分析第36-37页
            (三) 不同光照处理对GmTOEs候选基因的影响第37-39页
        二、大豆中miR172 靶基因的预测第39-41页
            (一) 软件预测大豆中miR172 的靶基因第39-40页
            (二) GmTOEs蛋白保守结构域比对第40-41页
        三、大豆中miR172 靶基因的鉴定第41-46页
            (一) 5’-RACE实验原理及流程第41-42页
            (二) 大豆miR172 对其靶基因切割位点分析第42-46页
第三章 大豆miR172 及其靶基因的表达模式分析第46-60页
    第一节 材料与方法第46-53页
        一、大豆材料第46页
        二、试验方法第46-53页
            (一) 取材方法第46-47页
            (二) 大豆Total RNA的提取第47页
            (三) mRNA的反转录第47-48页
            (四) 半定量PCR第48页
            (五) 实时荧光定量PCR(Real time-PCR)第48-50页
            (六) microRNA的检测第50-53页
    第二节 结果与分析第53-60页
        一、mi R172 及其靶基因GmTOEs的组织特异性表达模式第53-54页
        二、mi R172 及其靶基因GmTOEs的时间调控表达模式第54-58页
            (一) 短日照条件下miR172 及其靶基因的时间调控表达模式第54-56页
            (二) 长日照条件下miR172 及其靶基因的时间调控表达模式第56-58页
        三、mi R172 及其靶基因GmTOEs的昼夜节律表达第58-60页
第四章 大豆miR172 及其靶基因的功能研究第60-84页
    第一节材料与方法第60-70页
        一、试验材料第60-61页
            (一) 大豆材料第60页
            (二) 菌株第60页
            (三) 质粒第60页
            (四) 相关培养基第60-61页
            (五) 试剂第61页
        二、试验方法第61-70页
            (一) DNA的提取(CTAB法)第61-62页
            (二) 总RNA的提取第62页
            (三) 克隆引物设计第62-63页
            (四) TA克隆载体的构建第63-67页
            (五) 植物表达载体的构建第67-68页
            (六) 大豆的遗传转化(根癌农杆菌介导的大豆子叶节转化法)第68-70页
            (七) 大豆转基因后代的鉴定第70页
            (八) 大豆转基因后代的表型观察第70页
    第二节 结果与分析第70-84页
        一、大豆miR172 和GmTOE4a基因的克隆第70-75页
            (一) 大豆miR172 的克隆第70-72页
            (二) 大豆miR172 靶基因GmTOE4a的克隆第72-75页
        二、大豆转基因植株的鉴定与获得第75-76页
            (一) 除草剂的抗性检测第75页
            (二) 分子检测第75-76页
        三、大豆转基因植株的表型第76-84页
            (一) miR172 转基因大豆的表型第77-79页
            (二) GmTOE4a转基因大豆的表型第79-84页
第五章 大豆miR172 及其靶基因参与的光周期调控开花途径研究第84-105页
    第一节 材料与方法第84-86页
        一、大豆材料第84-85页
            (一) E1-E4 近等基因系材料第84页
            (二) 转基因材料第84-85页
        二、试验方法第85-86页
            (一) 取材方法第85页
            (二) 大豆Total RNA的提取第85-86页
            (三) mRNA的反转录第86页
            (四) 实时荧光定量PCR(Real time-PCR)第86页
            (五) microRNA的检测第86页
    第二节 结果与分析第86-104页
        一、mi R172 与其靶基因GmTOEs的调控关系第86-89页
            (一) miR172c主要在叶片中对其靶基因GmTOE4a起抑制作用第86-87页
            (二) GmTOE4a过表达促进同家族基因的表达第87-88页
            (三) GmTOE4a基因反馈调控miR172第88-89页
        二、mi R172 及其靶基因与生育期基因E3/E4 的调控关系第89-91页
        三、mi R172 及其靶基因与生育期基因E2 的调控关系第91-93页
        四、mi R172 及其靶基因与生育期基因E1 的调控关系第93-95页
            (一) E1 调控miR172 和GmTOE4a的表达第93-94页
            (二) miR172 负反馈调控E1第94-95页
        五、mi R172 及其靶基因与大豆成花相关基因的调控关系第95-99页
            (一) miR172c诱导大豆成花相关基因的表达第96-97页
            (二) GmTOE4a抑制大豆成花相关基因的表达第97-99页
        六、mi R172 及其靶基因与GmCOLs的调控关系第99-101页
        七、mi R172 及其靶基因与mi R156/GmSPLs的调控关系第101-104页
            (一) GmTOE4a调控miR156 及其靶基因GmSPL3/9第101-102页
            (二) miR156 调控miR172 及其靶基因GmTOEs第102-104页
    第三节 小结第104-105页
第六章 讨论第105-109页
    一、大豆中的TOE同源基因第105-106页
    二、大豆生育期基因E1/E3/E4对 miR172及其靶基因的调控第106-107页
    三、大豆miR172及其靶基因调控的光周期开花途径不同于拟南芥第107页
    四、GmTOE4a调控大豆植株形态第107-109页
第七章 全文结论第109-111页
    一、获得3个miR172的靶基因第109页
    二、分析了miR172及其靶基因GmTOEs的表达模式第109页
    三、验证了大豆miR172 的功能第109-110页
    四、验证了大豆GmTOE4a的功能第110页
    五、揭示了mi R172及其靶基因参与的大豆光周期调控开花途径第110-111页
参考文献第111-119页
附表第119-121页
发表文章第121-122页
致谢第122页

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