| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-40页 |
| 1.1 癌症与肿瘤干细胞 | 第12-19页 |
| 1.2 联合治疗在肿瘤干细胞治疗上的应用 | 第19-21页 |
| 1.3 同步输送药物的纳米载体及其在肿瘤治疗的应用 | 第21-29页 |
| 1.4 本课题选题目的和主要研究内容 | 第29-31页 |
| 参考文献 | 第31-40页 |
| 第二章 纳米载体同步输送全反式维甲酸和阿霉素协同抑制肿瘤干细胞的研究 | 第40-70页 |
| 2.1 引言 | 第40-42页 |
| 2.2 实验材料 | 第42-43页 |
| 2.2.1 主要材料 | 第42页 |
| 2.2.2 细胞株 | 第42页 |
| 2.2.3 实验动物 | 第42-43页 |
| 2.2.4 主要药品及试剂 | 第43页 |
| 2.3 实验方法 | 第43-50页 |
| 2.3.1 球囊细胞培养富集肿瘤干细胞 | 第43-44页 |
| 2.3.2 流式细胞术检测乳腺癌贴壁细胞和球囊细胞中乙醛脱氢酶高表达(ALDHh~(hi))细胞的比例 | 第44页 |
| 2.3.3 MTT法检测MDA-MB-231球囊细胞和贴壁细胞对阿霉素的耐受性 | 第44-45页 |
| 2.3.4 检测MDA-MB-231贴壁细胞和球囊细胞成瘤能力 | 第45页 |
| 2.3.5 载药纳米颗粒的制备以及表征 | 第45-46页 |
| 2.3.6 流式细胞术检测球囊细胞对纳米颗粒的摄取情况 | 第46页 |
| 2.3.7 HPLC检测球囊细胞对纳米颗粒的摄取情况 | 第46页 |
| 2.3.8 激光共聚焦检测纳米颗粒被球囊细胞摄取和分布情况 | 第46-47页 |
| 2.3.9 流式细胞术检测不同剂量全反式维甲酸对肿瘤干细胞分化作用 | 第47页 |
| 2.3.10 MTT检测不同剂量全反式维甲酸对球囊细胞的杀伤能力 | 第47页 |
| 2.3.11 MTT方法检测纳米颗粒运载全反式维甲酸和不同剂量阿霉素对球囊细胞的杀伤能力 | 第47页 |
| 2.3.12 流式细胞术检测不同实验组处理后ALDH~(hi)细胞比例变化 | 第47-48页 |
| 2.3.13 Real-time PCR检测肿瘤干细胞干性相关基因表达 | 第48页 |
| 2.3.14 通过成瘤能力的变化检测肿瘤干细胞的干性 | 第48页 |
| 2.3.15 HPLC定量检测药代动力学 | 第48-49页 |
| 2.3.16 MDA-MB-231乳腺癌原位肿瘤模型的建立 | 第49页 |
| 2.3.17 HPLC和流式细胞术检测药物在肿瘤和肿瘤干细胞中的富集 | 第49页 |
| 2.3.18 肿瘤生长抑制实验 | 第49-50页 |
| 2.3.19 流式细胞术检测乳腺癌中肿瘤干细胞的比例 | 第50页 |
| 2.3.20 肿瘤组织和脏器切片的H&E染色、PCNA染色 | 第50页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第50-64页 |
| 2.4.1 球囊培养富集MDA-MB-231肿瘤干细胞 | 第50-51页 |
| 2.4.2 不同ATRA和DOX载药比例的纳米颗粒制备 | 第51-52页 |
| 2.4.3 载药纳米颗粒提高肿瘤干细胞对药物的摄取 | 第52-54页 |
| 2.4.4 纳米颗粒同步输送ATRA和DOX对肿瘤干细胞干性的影响 | 第54-58页 |
| 2.4.5 载药纳米颗粒延长药物在血液循环时间 | 第58-59页 |
| 2.4.6 载药纳米颗粒增加药物在肿瘤部位和肿瘤干细胞内的富集 | 第59-60页 |
| 2.4.7 纳米颗粒同步输送ATRA和DOX协同增效抑制肿瘤生长 | 第60-62页 |
| 2.4.8 纳米颗粒同步输送ATRA和DOX有效降低体内水平肿瘤干细胞比例 | 第62-63页 |
| 2.4.9 纳米颗粒同步输送ATRA和DOX的安全性评估 | 第63-64页 |
| 2.5 本章小结 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 第三章 抑制肿瘤干细胞自噬联合化疗药物协同治疗癌症的研究 | 第70-108页 |
| 3.1 引言 | 第70-72页 |
| 3.2 实验材料 | 第72-73页 |
| 3.2.1 主要材料 | 第72页 |
| 3.2.2 细胞株 | 第72页 |
| 3.2.3 实验动物 | 第72页 |
| 3.2.4 主要药品及试剂 | 第72-73页 |
| 3.3 实验方法 | 第73-83页 |
| 3.3.1 流式细胞仪分选高表达ALDH(ALDH~(hi))的MDA-MB-231细胞 | 第73-74页 |
| 3.3.2 Western blot检测ALDH~(hi)和ALDH~(low) MDA-MB-231细胞中LC3表达水平 | 第74页 |
| 3.3.3 Western blot检测不同剂量氯喹处理后ALDH~(hi)MDA-MB-231细胞LC3和P62蛋白表达水平 | 第74-75页 |
| 3.3.4 流式细胞术检测不同剂量氯喹处理ALDH-MDA-MB-231细胞中ALDH~(hi)比例变化 | 第75页 |
| 3.3.5 MTT方法检测不同剂量化疗药物联合氯喹对ALDH~(hi)-MDA-MB-231细胞的抑制作用 | 第75页 |
| 3.3.6 球囊形成实验检测氯喹处理ALDH~(hi) MDA-MB-231细胞后自我更新能力 | 第75-76页 |
| 3.3.7 Real-time PCR检测联合氯喹处理细胞后干性相关基因的表达情况 | 第76页 |
| 3.3.8 Western blot检测3MA和wortmannin处理后ALDH~(hi) MDA-MB-231细胞LC3蛋白表达水平 | 第76页 |
| 3.3.9 流式细胞术检测检测3MA和wortmannin作用后ALDH~(hi) MDA-MB-231细胞中ALDH~(hi)比例变化 | 第76页 |
| 3.3.10 球囊形成实验检测3MA和wortmannin处理后ALDH-MDA-MB-231细胞自我更新能力 | 第76-77页 |
| 3.3.11 转染pCas9/ATG5 gRNA下调ALDH~(hi) MDA-MB-231细胞ATG5表达 | 第77页 |
| 3.3.12 Western blot检测转染pCas9/ATG5 gNRA后ALDH-MDA-MB-231细胞ATG | 第77页 |
| 3.3.13 Western blot检测氯喹联合化疗药物处理ALDH~(hi) MDA-MB-231后自噬相关蛋白表达水平 | 第77-78页 |
| 3.3.14 激光共聚焦显微镜观察GFP-LC3表达的ALDH~(hi)MDA-MB-231细胞中荧光聚集情况 | 第78页 |
| 3.3.15 流式细胞术检测联合氯喹和化疗药物处理细胞后ALDH~(hi)MDA-MB-231细胞比例 | 第78页 |
| 3.3.16 Real-time PCR检测联合氯喹和化疗药物处理ALDH~(hi) MDA-MB-231后于性相关基因的表达情况 | 第78页 |
| 3.3.17 球囊形成实验检测联合氯喹和化疗药物处理后ALDH~(hi) MDA-MB-231细胞的自我更新能力 | 第78-79页 |
| 3.3.18 载药纳米颗粒的制备以及表征 | 第79页 |
| 3.3.19 HPLC检测ALDH-MDA-MB-231细胞对纳米颗粒的摄取情况 | 第79-80页 |
| 3.3.20 激光共聚焦检测ALDH-MDA-MB-231细胞对载药纳米颗粒的摄取 | 第80页 |
| 3.3.21 Westem blot检测载药纳米颗粒处理细胞后自噬相关蛋白表达水平 | 第80页 |
| 3.3.22 激光共聚焦观察载药纳米颗粒处理后GFP-LC3表达的ALDH~(hi) MDA-MB-231细胞荧光聚集情况 | 第80页 |
| 3.3.23 流式细胞术检测载药纳米颗粒处理细胞后ALDH~(hi)比例变化 | 第80-81页 |
| 3.3.24 球囊形成检测载药纳米颗粒处理ALDH~(hi) MDA-MB-231细胞后自我更新能力 | 第81页 |
| 3.3.25 Real-time PCR检测载药纳米颗粒处理后ALDH~(hi) MDA-MB-231细胞干性相关基因表达情况 | 第81页 |
| 3.3.26 MTT方法检测载药纳米颗粒对ALDH~(hi) MDA-MB-231细胞的杀伤能力 | 第81页 |
| 3.3.27 HPLC定量检测药代动力学情况 | 第81-82页 |
| 3.3.28 MDA-MB-231乳腺癌原位肿瘤模型的建立 | 第82页 |
| 3.3.29 HPLC和流式细胞术分别检测药物在肿瘤部位和肿瘤干细胞中的富集 | 第82-83页 |
| 3.3.30 肿瘤生长抑制实验 | 第83页 |
| 3.3.31 Western blot检测治疗后乳腺癌肿瘤细胞中自噬水平 | 第83页 |
| 3.3.32 流式细胞术检测乳腺癌中肿瘤干细胞的比例 | 第83页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第83-102页 |
| 3.4.1 抑制自噬降低MDA-MB-231乳腺肿瘤干细胞的干性 | 第83-88页 |
| 3.4.2 联合氯喹和化疗药物抑制肿瘤干细胞自噬并提高肿瘤干细胞杀伤能力 | 第88-91页 |
| 3.4.3 载药纳米颗粒的制备以及表征 | 第91-92页 |
| 3.4.4 载药纳米颗粒提高肿瘤干细胞对药物的摄取 | 第92-94页 |
| 3.4.5 同步输送纳米颗粒提高肿瘤干细胞的自噬抑制和干性抑制能力 | 第94-98页 |
| 3.4.6 同步输送纳米载体提高药物的血液循环时间 | 第98-99页 |
| 3.4.7 同步输送纳米载体增加药物在肿瘤组织和肿瘤干细胞中的富集 | 第99页 |
| 3.4.8 同步输送氯喹和化疗药物提高肿瘤生长抑制能力 | 第99-100页 |
| 3.4.9 同步输送氯喹和化疗药物降低体内肿瘤细胞自噬水平 | 第100-101页 |
| 3.4.10 同步输送氯喹和化疗药物增强肿瘤干细胞抑制能力 | 第101-102页 |
| 3.5 本章小结 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-108页 |
| 附录一 主要仪器设备 | 第108-110页 |
| 附录二 常规试剂 | 第110-112页 |
| 附录三 主要溶液配制 | 第112-116页 |
| 附录四 常规实验方法 | 第116-122页 |
| 致谢 | 第122-124页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第124-125页 |
