中文摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
第1章 绪论 | 第12-20页 |
1.1 胃癌及其危害 | 第12-13页 |
1.2 缺氧诱导因子 | 第13-16页 |
1.2.1 转录因子 | 第13页 |
1.2.2 缺氧诱导因子 | 第13-14页 |
1.2.3 缺氧诱导因子的成员及结构 | 第14页 |
1.2.4 缺氧诱导因子的功能和作用机制 | 第14-15页 |
1.2.5 缺氧诱导因子的临床意义 | 第15-16页 |
1.3 microRNA | 第16-18页 |
1.3.1 miRNA的发现和命名 | 第16页 |
1.3.2 miRNA的生物合成 | 第16-17页 |
1.3.3 miRNA的功能及作用机制 | 第17-18页 |
1.3.4 miRNA的应用 | 第18页 |
1.4 肿瘤细胞的分子调控 | 第18-20页 |
第2章 HIF-1α与miRNA5743p在胃癌AGS细胞的研究 | 第20-44页 |
2.1 仪器和材料 | 第20-23页 |
2.1.1 主要仪器 | 第20-21页 |
2.1.2 主要试剂和耗材 | 第21-23页 |
2.1.3 主要试剂配制 | 第23页 |
2.1.4 细胞株来源 | 第23页 |
2.2 实验方法 | 第23-32页 |
2.2.1 胃癌AGS细胞培养 | 第23-24页 |
2.2.2 光镜下观察AGS细胞的形态 | 第24页 |
2.2.3 缺氧培养条件 | 第24页 |
2.2.4 Western Blot法检测相关蛋白表达 | 第24-28页 |
2.2.5 RNA提取 | 第28页 |
2.2.6 RNA定量 | 第28-29页 |
2.2.7 DNA&RNA转染 | 第29页 |
2.2.8 逆转录反应 | 第29-30页 |
2.2.9 PCR反应 | 第30-31页 |
2.2.10 实时定量PCR反应 | 第31页 |
2.2.11 琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
2.2.12 双荧光素酶报告系统 | 第31页 |
2.2.13 质粒的提取 | 第31-32页 |
2.3 数据处理 | 第32页 |
2.4 实验结果 | 第32-44页 |
2.4.1 CoCl_2和缺氧环境下AGS细胞的形态学变化 | 第32-33页 |
2.4.2 CoCl_2或缺氧环境下AGS细胞HIF-1α蛋白的水平 | 第33-34页 |
2.4.3 CoCl_2刺激上调AGS细胞中VEGF mRNA的表达 | 第34-35页 |
2.4.4 CoCl_2或缺氧环境下AGS细胞中miR5743p的表达 | 第35-36页 |
2.4.5 HIF-1α的抑制剂能够抑制miR5743p的表达 | 第36-38页 |
2.4.6 si-HIF-1α能够抑制miR5743p的表达 | 第38-39页 |
2.4.7 pcDNA3-HIF-1α(Mut)质粒的酶切验证 | 第39页 |
2.4.8 转染pcDNA3-HIF-1α(Mut)质粒的蛋白表达 | 第39-40页 |
2.4.9 转染pcDNA3-HIF-1α(Mut)质粒上调miR5743p的表达 | 第40-41页 |
2.4.10 双荧光素酶报告基因的验证 | 第41-42页 |
2.4.11 转染pEGFP(C1)-miR574质粒检测其的表达 | 第42-43页 |
2.4.12 转染pEGFP(C1)-mi R574质粒上调HIF-1α的表达 | 第43-44页 |
第3章 讨论 | 第44-46页 |
第4章 结论 | 第46-47页 |
参考文献 | 第47-52页 |
在学期间获得的研究成果 | 第52-53页 |
致谢 | 第53页 |