| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 引言 | 第13-30页 |
| 1.1 Fc融合蛋白研究进展 | 第13-18页 |
| 1.1.1 Fc融合蛋白在抗体类生物药物的地位 | 第13-15页 |
| 1.1.2 生物药物的长效化 | 第15-16页 |
| 1.1.3 免疫球蛋白IgG | 第16页 |
| 1.1.4 Fc蛋白融合药物的制备 | 第16-18页 |
| 1.2 哺乳动物细胞表达生物药物的进展 | 第18-25页 |
| 1.2.1 细胞体外培养的发展 | 第18页 |
| 1.2.2 外源基因的表达体系 | 第18-19页 |
| 1.2.2.1 原核细胞表达体系 | 第18页 |
| 1.2.2.2 酵母、昆虫及植物等真核细胞表达体系 | 第18页 |
| 1.2.2.3 哺乳动物细胞表达体系 | 第18-19页 |
| 1.2.3 哺乳动物细胞的大规模培养 | 第19-25页 |
| 1.2.3.1 生物反应器 | 第19-20页 |
| 1.2.3.2 哺乳动物细胞大规模培养方式 | 第20-22页 |
| 1.2.3.3 培养基的优化 | 第22-24页 |
| 1.2.3.4 细胞培养的工艺放大 | 第24-25页 |
| 1.3 Fc融合蛋白的纯化 | 第25-28页 |
| 1.3.1 深层过滤 | 第26页 |
| 1.3.2 亲和层析 | 第26-27页 |
| 1.3.3 低pH病毒灭活 | 第27页 |
| 1.3.4 离子交换层析 | 第27-28页 |
| 1.3.5 纳米膜过滤 | 第28页 |
| 1.3.6 超滤换液 | 第28页 |
| 1.4 论文的立题思想 | 第28-30页 |
| 第2章 Fc融合蛋白的CHO细胞表达 | 第30-48页 |
| 2.1 前言 | 第30页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第30-31页 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 | 第30页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第30-31页 |
| 2.3 溶液配制 | 第31页 |
| 2.3.1 种子培养基及流加培养基 | 第31页 |
| 2.3.2 细胞冻存液 | 第31页 |
| 2.4 实验方法 | 第31-37页 |
| 2.4.1 细胞冻存 | 第31-32页 |
| 2.4.2 细胞复苏与传代培养 | 第32页 |
| 2.4.3 基础培养基的混合优化试验 | 第32页 |
| 2.4.4 流加策略试验 | 第32-33页 |
| 2.4.5 生物反应器扩大培养 | 第33-34页 |
| 2.4.6 SDS-PAGE凝胶电泳方法 | 第34-36页 |
| 2.4.6.1 溶液配制 | 第34-35页 |
| 2.4.6.2 装板 | 第35页 |
| 2.4.6.3 凝胶配制及灌注 | 第35页 |
| 2.4.6.4 电泳样品的处理 | 第35-36页 |
| 2.4.6.5 进料 | 第36页 |
| 2.4.6.6 开始跑电泳 | 第36页 |
| 2.4.6.7 染色 | 第36页 |
| 2.4.6.8 脱色 | 第36页 |
| 2.4.7 考马斯亮蓝染色法 | 第36-37页 |
| 2.4.7.1 考马斯亮蓝试剂配制 | 第36-37页 |
| 2.4.7.2 标准曲线绘制 | 第37页 |
| 2.4.7.3 样品测定 | 第37页 |
| 2.5 试验结果与讨论 | 第37-47页 |
| 2.5.1 摇瓶基础培养基及流加策略优化 | 第37-40页 |
| 2.5.1.1 细胞生长曲线 | 第37-39页 |
| 2.5.1.2 终止培养时SDS-PAGE凝胶电泳灰度扫描测定蛋白表达情况 | 第39-40页 |
| 2.5.1.3 终止培养时考马斯亮蓝法测蛋白表达量 | 第40页 |
| 2.5.2 进一步摇瓶基础培养基优化试验 | 第40-42页 |
| 2.5.2.1 细胞生长曲线 | 第40-41页 |
| 2.5.2.2 培养终止时蛋白表达量 | 第41-42页 |
| 2.5.3 5L生物反应器试验 | 第42-47页 |
| 2.5.3.1 细胞培养生长曲线 | 第42-43页 |
| 2.5.3.2 蛋白表达情况 | 第43-44页 |
| 2.5.3.3 培养过程中生化值情况 | 第44-47页 |
| 2.6 本章小结 | 第47-48页 |
| 第3章 Fc融合蛋白的纯化及表征 | 第48-68页 |
| 3.1 前言 | 第48页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第48-50页 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 | 第48-49页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第49-50页 |
| 3.3 实验方法 | 第50-55页 |
| 3.3.1 Protein A亲和层析纯化 | 第50-51页 |
| 3.3.1.1 缓冲液配制 | 第50页 |
| 3.3.1.2 操作方法 | 第50-51页 |
| 3.3.2 Protein A亲和层析洗脱条件测试 | 第51页 |
| 3.3.3 Protein A亲和层析填料载量测试 | 第51页 |
| 3.3.4 不同亲和层析填料纯化效果比较试验 | 第51页 |
| 3.3.5 Fc融合蛋白等电点测试 | 第51-53页 |
| 3.3.5.1 Zeta电位和等电点 | 第52-53页 |
| 3.3.5.2 等电点测试 | 第53页 |
| 3.3.6 Q Sepharose FF阴离子纯化 | 第53-54页 |
| 3.3.6.1 缓冲液配制 | 第53页 |
| 3.3.6.2 纯化步骤 | 第53-54页 |
| 3.3.6.3 阴离子层析条件测试 | 第54页 |
| 3.3.7 HPLC测试样品纯度 | 第54-55页 |
| 3.3.7.1 缓冲液配制 | 第54页 |
| 3.3.7.2 样品处理 | 第54页 |
| 3.3.7.3 测试步骤 | 第54-55页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第55-67页 |
| 3.4.1 Protein A亲和层析洗脱条件的结果 | 第55-57页 |
| 3.4.2 不同亲和填料的比较 | 第57-62页 |
| 3.4.2.1 载量的比较 | 第57-60页 |
| 3.4.2.2 纯化效果的比较 | 第60-62页 |
| 3.4.3 Fc融合蛋白等电点测定 | 第62-63页 |
| 3.4.4 Q Sepharose FF阴离子纯化 | 第63-67页 |
| 3.5 本章小结 | 第67-68页 |
| 第4章 结论与展望 | 第68-71页 |
| 4.1 主要结论 | 第68-69页 |
| 4.1.1 细胞培养工艺中的基础培养基混合模式优化和流加策略优化的研究 | 第68页 |
| 4.1.2 对Fc融合蛋白纯化进行研究 | 第68-69页 |
| 4.2 今后工作建议 | 第69-71页 |
| 4.2.1 关于生物反应器的放大培养 | 第69页 |
| 4.2.2 关于蛋白的纯化 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 附录一 缩写词 | 第77-79页 |
| 附录二 致谢 | 第79-80页 |
| 附录三 个人简历及发表文章目录 | 第80页 |
