| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一章 病毒 | 第14-23页 |
| 1.1 甲型流感病毒概述 | 第14-15页 |
| 1.2 甲型流感病毒的复制周期 | 第15-16页 |
| 1.3 甲型流感病毒的分子生物学结构 | 第16-21页 |
| 1.4 其他DNA或RNA病毒 | 第21-23页 |
| 1.4.1 乙型肝炎病毒 | 第21-22页 |
| 1.4.2 水泡性口炎病毒 | 第22页 |
| 1.4.3 肠道病毒EV71 | 第22-23页 |
| 第二章 | 第23-29页 |
| 2.1 干扰素的概述 | 第23-25页 |
| 2.2 干扰素诱导抗病毒蛋白 | 第25-26页 |
| 2.3 流感病毒拮抗干扰素机制 | 第26-29页 |
| 第三章 鸟苷酸结合蛋白 | 第29-30页 |
| 第四章 炎症和环加氧酶 | 第30-32页 |
| 第五章 甲型流感病毒诱导GBP5的表达 | 第32-48页 |
| 前言 | 第32页 |
| 5.1 实验材料 | 第32-34页 |
| 5.1.1 实验样品及细胞 | 第32-33页 |
| 5.1.2 实验质粒、试剂及引物 | 第33页 |
| 5.1.3 实验耗材及仪器 | 第33-34页 |
| 5.2 实验方法 | 第34-42页 |
| 5.2.1 总RNA的提取及逆转录 | 第34-35页 |
| 5.2.2 实时荧光定量PCR | 第35页 |
| 5.2.3 PBMC的分离 | 第35-36页 |
| 5.2.4 贴壁(哺乳动物)细胞的复苏,培养,传代和冻存 | 第36页 |
| 5.2.5 流感病毒的扩增 | 第36-37页 |
| 5.2.6 鸡血凝集实验检测流感病毒效价 | 第37页 |
| 5.2.7 细胞瞬时转染实验 | 第37-38页 |
| 5.2.8 荧光素酶活性检测 | 第38页 |
| 5.2.9 染色质免疫共沉淀(ChiP)实验 | 第38-39页 |
| 5.2.10 质粒抽提 | 第39页 |
| 5.2.11 免疫印迹 | 第39-40页 |
| 5.2.12 质粒的克隆和构建 | 第40-42页 |
| 5.3 实验结果 | 第42-47页 |
| 5.3.1 GBP5在甲型流感病毒感染的病人体内高表达 | 第42页 |
| 5.3.2 GBP5在H3N2感染的原代细胞中高表达 | 第42-43页 |
| 5.3.3 流感病毒在癌细胞中诱导GBP5表达 | 第43-44页 |
| 5.3.4 EV71在RD细胞中诱导GBP5上调 | 第44-45页 |
| 5.3.5 流感病毒感染诱导GBP5蛋白水平上调 | 第45页 |
| 5.3.6 GBP5启动子的分析研究 | 第45-46页 |
| 5.3.7 对GBP5截短突变体启动子的研究 | 第46-47页 |
| 5.3.8 染色质免疫共沉淀验证实验 | 第47页 |
| 5.4 本章小结与讨论 | 第47-48页 |
| 第六章 GBP5对多种病毒具有拮抗作用 | 第48-57页 |
| 前言 | 第48页 |
| 6.1 实验材料 | 第48-49页 |
| 6.1.1 实验用病毒 | 第48页 |
| 6.1.2 实验使用试剂及抗体 | 第48-49页 |
| 6.2 实验方法 | 第49-51页 |
| 6.2.1 甲型流感病毒、肠道病毒71型及水泡性口炎病毒的扩增 | 第49页 |
| 6.2.2 甲型流感病毒复制水平的检测 | 第49-50页 |
| 6.2.3 乙型肝炎病毒E抗原和S抗原的检测 | 第50页 |
| 6.2.4 水泡性口炎病毒的噬斑实验 | 第50-51页 |
| 6.2.5 以pLKO.1构建的shRNA质粒 | 第51页 |
| 6.2.6 western blot | 第51页 |
| 6.2.7 荧光素酶活性的检测 | 第51页 |
| 6.3 实验结果 | 第51-56页 |
| 6.3.1 GBP5抑制甲型流感病毒的复制 | 第51-52页 |
| 6.3.2 GBP5抑制VSV的复制 | 第52页 |
| 6.3.3 GBP5抑制EV71的复制 | 第52-53页 |
| 6.3.4 GBP5抑制HBV1.3倍体扩增形成的HBV的复制 | 第53-54页 |
| 6.3.5 构建GBP5的干扰RNA质粒 | 第54页 |
| 6.3.6 GBP5干扰RNA促进甲型流感病毒的复制 | 第54-55页 |
| 6.3.7 GBP5在IFN功能缺失细胞系中无法发挥抗病毒功能 | 第55-56页 |
| 6.4 本章小结 | 第56-57页 |
| 第七章 GBP5诱导多种干扰素的表达 | 第57-66页 |
| 前言 | 第57页 |
| 7.1 实验材料 | 第57页 |
| 7.1.1 实验用质粒 | 第57页 |
| 7.1.2 实验试剂和耗材 | 第57页 |
| 7.1.3 实验仪器 | 第57页 |
| 7.2 实验方法 | 第57-60页 |
| 7.2.1 MTT实验 | 第57-58页 |
| 7.2.2 细胞核细胞质分离实验 | 第58-59页 |
| 7.2.3 免疫共沉淀实验 | 第59-60页 |
| 7.2.4 免疫荧光染色实验 | 第60页 |
| 7.3 实验结果 | 第60-65页 |
| 7.3.1 GBP5促进干扰素和NFκB的启动子高表达 | 第60-61页 |
| 7.3.2 GBP5不明显影响细胞的生长 | 第61页 |
| 7.3.3 GBP5在转录水平促进干扰素的高表达 | 第61-62页 |
| 7.3.4 GBP5在蛋白水平促进干扰素的表达 | 第62-63页 |
| 7.3.5 GBP5促进干扰素通路下游基因的表达 | 第63页 |
| 7.3.6 GBP5促进p50及p65的入核 | 第63-64页 |
| 7.3.7 GBP5与NEMO复合物相互作用 | 第64-65页 |
| 结果与讨论 | 第65-66页 |
| 第八章 GBP5诱导包括COX2在内的炎症因子的表达 | 第66-71页 |
| 前言 | 第66页 |
| 8.1 实验材料 | 第66页 |
| 8.1.1 实验试剂 | 第66页 |
| 8.1.2 实验用引物 | 第66页 |
| 8.2 实验方法 | 第66-67页 |
| 8.2.1 启动子分析实验 | 第66页 |
| 8.2.2 mRNA提取及里转录 | 第66-67页 |
| 8.2.3 western blot | 第67页 |
| 8.2.4 染色质免疫共沉淀 | 第67页 |
| 8.2.5 荧光实时定量PCR | 第67页 |
| 8.3 实验结果 | 第67-70页 |
| 8.3.1 过表达GBP5蛋白促进多种细胞炎症因子表达 | 第67页 |
| 8.3.2 GBP5能随时间依赖上调A549细胞中的COX-2的表达水平 | 第67-68页 |
| 8.3.3 GBP5能随剂量依赖上调A549细胞中COX-2的表达水平 | 第68-69页 |
| 8.3.4 COX-2的启动子突变体筛选 | 第69页 |
| 8.3.5 染色质免疫共沉淀确认实验 | 第69-70页 |
| 小结与讨论 | 第70-71页 |
| 第九章 总结与讨论 | 第71-74页 |
| 参考文献 | 第74-83页 |
| 攻博期间发表的科研成果目录 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
