| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-28页 |
| 1.绿色荧光蛋白 | 第11-16页 |
| 2.葡萄球菌蛋白A | 第16-19页 |
| 3.免疫荧光测定法 | 第19-24页 |
| 4.毕赤酵母表达系统 | 第24-25页 |
| 5.本研究的总体思路 | 第25-28页 |
| 第二章 SPA-EGFP融合蛋白毕赤酵母表达菌株的构建 | 第28-44页 |
| 1.实验材料 | 第28-32页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第28-29页 |
| 1.2 培养基 | 第29-30页 |
| 1.3 试剂 | 第30-31页 |
| 1.4 主要仪器 | 第31-32页 |
| 2.实验方法 | 第32-38页 |
| 2.1 PCR扩增spa-egfp基因 | 第32-33页 |
| 2.2 pPIC9K/spa-egfp表达载体的构建 | 第33-36页 |
| 2.3 毕赤酵母表达菌株的构建 | 第36-38页 |
| 3.实验结果 | 第38-42页 |
| 3.1 spa-egfp融合基因的扩增 | 第38-39页 |
| 3.2 pPIC9K/spa-egfp表达载体的构建与鉴定 | 第39-41页 |
| 3.3 重组毕赤酵母工程菌株的构建与筛选 | 第41-42页 |
| 4.本章小结 | 第42-44页 |
| 第三章 SPA-EGFP融合蛋白在毕赤酵母中的表达、纯化及活性检测 | 第44-62页 |
| 1.实验材料 | 第44-47页 |
| 1.1 菌株 | 第44页 |
| 1.2 培养基 | 第44页 |
| 1.3 试剂 | 第44-46页 |
| 1.4 主要仪器 | 第46-47页 |
| 2.实验方法 | 第47-51页 |
| 2.1 重组毕赤酵母工程菌的诱导表达 | 第47页 |
| 2.2 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第47页 |
| 2.3 SPA-EGFP融合蛋白的分离纯化 | 第47-48页 |
| 2.4 SPA-EGFP融合蛋白的荧光活性测定 | 第48页 |
| 2.5 SPA-EGFP融合蛋白的免疫学活性测定 | 第48-49页 |
| 2.6 重组毕赤酵母工程菌分泌表达条件的优化 | 第49-51页 |
| 3.实验结果 | 第51-59页 |
| 3.1 GS115/pPIC9K/spa-egfp的诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第51-52页 |
| 3.2 SPA-EGFP融合蛋白的分离纯化 | 第52-53页 |
| 3.3 SPA-EGFP融合蛋白的荧光活性测定 | 第53-54页 |
| 3.4 SPA-EGFP融合蛋白的免疫学活性测定 | 第54页 |
| 3.5 重组毕赤酵母工程菌分泌表达条件的优化 | 第54-59页 |
| 4.本章小结 | 第59-62页 |
| 第四章 SPA-EGFP融合蛋白在免疫诊断中的应用 | 第62-72页 |
| 1.实验材料 | 第62页 |
| 1.1 试剂 | 第62页 |
| 1.2 主要仪器 | 第62页 |
| 2.实验方法 | 第62-63页 |
| 2.1 间接免疫荧光法操作流程(欧蒙滴定平板技术~(TM)) | 第62-63页 |
| 2.2 直接免疫荧光法操作流程 | 第63页 |
| 3.实验结果 | 第63-67页 |
| 3.1 抗细胞核抗体的间接免疫荧光检测 | 第63-65页 |
| 3.2 抗肺炎支原体IgG抗体的间接免疫荧光检测 | 第65-66页 |
| 3.3 天疱疮抗体的直接免疫荧光检查 | 第66-67页 |
| 4.本章小结 | 第67-72页 |
| 第五章 结论与展望 | 第72-74页 |
| 附录Ⅰ pPIC9K载体信息 | 第74-75页 |
| 附录Ⅱ spa-egfp融合基因测序结果 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第86-87页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第87页 |
