| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 中英文缩略语表 | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-36页 |
| 1.1 植物MYB转录因子研究 | 第17-22页 |
| 1.1.1 植物MYB转录因子的特征与分类 | 第17-18页 |
| 1.1.2 植物MYB转录因子的起源与进化 | 第18-19页 |
| 1.1.3 植物MYB转录因子的功能 | 第19-22页 |
| 1.2 大豆中的MYB转录因子 | 第22-23页 |
| 1.3 植物转录因子功能研究方法 | 第23-27页 |
| 1.3.1 植物转录因子瞬间表达法 | 第24-25页 |
| 1.3.2 突变体或转基因植株功能分析 | 第25-27页 |
| 1.4 大豆异黄酮的研究 | 第27-35页 |
| 1.4.1 大豆异黄酮的种类与分布 | 第28页 |
| 1.4.2 异黄酮的生物合成及其关键酶基因 | 第28-30页 |
| 1.4.3 异黄酮生物合成途径的调控 | 第30-32页 |
| 1.4.4 异黄酮的生理功能 | 第32-35页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第35-36页 |
| 第二章 大豆两个MYB转录因子的克隆及序列分析 | 第36-48页 |
| 2.1 材料 | 第36页 |
| 2.1.1 植物材料及菌株 | 第36页 |
| 2.1.2 工具酶及生化试剂 | 第36页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第36页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第36页 |
| 2.2 方法 | 第36-42页 |
| 2.2.1 大豆总RNA的提取 | 第36-37页 |
| 2.2.2 第一链cDNA的合成 | 第37-38页 |
| 2.2.3 大豆两个MYB基因cDNA全长PCR扩增 | 第38页 |
| 2.2.4 PCR产物回收 | 第38-39页 |
| 2.2.5 PCR产物的克隆 | 第39页 |
| 2.2.6 大肠杆菌DH5 α感受态细胞的制备及转化 | 第39-40页 |
| 2.2.7 转化子的蓝、白斑筛选 | 第40页 |
| 2.2.8 转化子的鉴定 | 第40-42页 |
| 2.2.9 大豆两个MYB基因的序列分析 | 第42页 |
| 2.3 结果 | 第42-46页 |
| 2.3.1 大豆两个MYB基因cDNA全长序列的获得 | 第42-44页 |
| 2.3.2 两个MYB基因的序列特征分析及编码蛋白的结构功能预测 | 第44-46页 |
| 2.4 讨论 | 第46-47页 |
| 2.5 小结 | 第47-48页 |
| 第三章 GmMYB12a与GmMYB12B2功能的初步分析 | 第48-64页 |
| 3.1 材料 | 第48-49页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第48页 |
| 3.1.2 菌株及质粒 | 第48页 |
| 3.1.3 工具酶及生化试剂 | 第48页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第48页 |
| 3.1.5 PCR引物 | 第48-49页 |
| 3.1.6 实验中用到的培养基及药品配制 | 第49页 |
| 3.2 方法 | 第49-54页 |
| 3.2.1 表达载体的构建 | 第49页 |
| 3.2.2 重组蛋白在宿主菌Rosetta(DE3)中的诱导表达及鉴定 | 第49-50页 |
| 3.2.3 酵母感受态细胞的制备及转化 | 第50-51页 |
| 3.2.4 β-半乳糖苷酶活性滤纸分析 | 第51页 |
| 3.2.5 农杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第51-52页 |
| 3.2.6 农杆菌介导法转化洋葱表皮细胞 | 第52页 |
| 3.2.7 半定量RT-PCR方法分析两基因对不同胁迫的应答 | 第52-54页 |
| 3.3 结果 | 第54-61页 |
| 3.3.1 表达载体的构建 | 第54-56页 |
| 3.3.2 GmMYB12a与GmMYB12B2在大肠杆菌中的高效表达 | 第56-57页 |
| 3.3.3 GmMYBl2a与GmMYB12B2的转录激活活性验证 | 第57-58页 |
| 3.3.4 GmMYB12a与GmMYB12B2的亚细胞定位 | 第58-60页 |
| 3.3.5 GmMYB12a与GmMYB12B2对不同胁迫的应答 | 第60-61页 |
| 3.4 讨论 | 第61-62页 |
| 3.5 小结 | 第62-64页 |
| 第四章 GmMYB12a和GmMYB12B2与异黄酮合成途径的关系 | 第64-76页 |
| 4.1 材料 | 第64-65页 |
| 4.1.1 植物材料及质粒 | 第64页 |
| 4.1.2 工具酶及生化试剂 | 第64页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第64页 |
| 4.1.4 PCR引物 | 第64-65页 |
| 4.2 方法 | 第65-68页 |
| 4.2.1 大豆不同组织总RNA的提取及反转录 | 第65页 |
| 4.2.2 Real Time PCR分析两基因的组织表达特性 | 第65-66页 |
| 4.2.3 大豆不同组织异黄酮的提取 | 第66页 |
| 4.2.4 HPLC法测定大豆不同组织的异黄酮含量 | 第66-67页 |
| 4.2.5 CHS8P植物表达载体的构建及转化农杆菌 | 第67页 |
| 4.2.6 农杆菌介导法侵染大豆愈伤组织 | 第67页 |
| 4.2.7 GUS组织化学染色 | 第67页 |
| 4.2.8 GUS荧光测定 | 第67-68页 |
| 4.3 结果 | 第68-73页 |
| 4.3.1 GmMB12a与GmMYB12B2在大豆不同组织的表达 | 第68-69页 |
| 4.3.2 大豆不同组织异黄酮含量分析 | 第69-70页 |
| 4.3.3 CHS8P植物表达载体的构建及转化农杆菌 | 第70-71页 |
| 4.3.4 各表达载体在大豆愈伤组织的瞬时表达分析 | 第71-73页 |
| 4.4 讨论 | 第73-74页 |
| 4.5 小结 | 第74-76页 |
| 第五章 GmMYB12a与GmMYB12B2在拟南芥中的表达及其相关功能分析 | 第76-87页 |
| 5.1 材料 | 第76-78页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第76页 |
| 5.1.2 菌株及质粒 | 第76页 |
| 5.1.3 工具酶及生化试剂 | 第76页 |
| 5.1.4 主要仪器设备 | 第76页 |
| 5.1.5 PCR引物 | 第76-77页 |
| 5.1.6 实验中用到的培养基及药品配制 | 第77-78页 |
| 5.2 方法 | 第78-80页 |
| 5.2.1 植物表达载体的构建 | 第78页 |
| 5.2.2 植物表达载体转化农杆菌及鉴定 | 第78页 |
| 5.2.3 GmMYB12a与GmMYB12B2向拟南芥中的转化 | 第78-79页 |
| 5.2.4 转基因拟南芥的筛选及鉴定 | 第79页 |
| 5.2.5 转基因拟南芥T3代类黄酮合成途径中各关键酶的表达 | 第79页 |
| 5.2.6 转基因拟南芥T3代的抗性分析 | 第79-80页 |
| 5.3 结果 | 第80-85页 |
| 5.3.1 植物表达载体的构建 | 第80-81页 |
| 5.3.2 植物表达载体转化农杆菌及鉴定 | 第81页 |
| 5.3.3 转基因拟南芥植株的筛选及检测 | 第81-83页 |
| 5.3.4 转基因拟南芥T3代类黄酮合成途径中各关键酶的表达 | 第83页 |
| 5.3.5 转基因拟南芥T3代的抗性分析结果 | 第83-85页 |
| 5.4 讨论 | 第85-86页 |
| 5.5 小结 | 第86-87页 |
| 结论 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-98页 |
| 附录 | 第98-106页 |
| 作者简介 | 第106-107页 |
| 攻博期间发表的学术论文及其他成果 | 第107-108页 |
| 导师简介 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
