| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 缩略语表 | 第5-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-20页 |
| 1.1 唾液酸的介绍 | 第10-15页 |
| 1.2 N-乙酰神经氨酸醛缩酶的介绍 | 第15-18页 |
| 1.3 密码子对蛋白表达的影响 | 第18-19页 |
| 1.4 主要研究内容和意义 | 第19-20页 |
| 1.4.1 主要内容 | 第19页 |
| 1.4.2 研究意义 | 第19-20页 |
| 第二章 密码子对蛋白表达的调节 | 第20-48页 |
| 2.1 材料、仪器与试剂 | 第20-23页 |
| 2.1.1 材料 | 第20页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.3 培养基和溶液 | 第21-22页 |
| 2.1.4 生化试剂 | 第22-23页 |
| 2.2 方法与步骤 | 第23-31页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第23-24页 |
| 2.2.2 细菌基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.3 N-乙酰葡萄糖胺差向异构酶和N-乙酰神经氨酸醛缩酶基因扩增 | 第25-26页 |
| 2.2.4 DNA产物纯化试剂盒纯化PCR | 第26页 |
| 2.2.5 质粒的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.6 质粒pRX4和目的片段的双酶切 | 第27页 |
| 2.2.7 普通DNA凝胶回收试剂盒回收目的片段 | 第27-28页 |
| 2.2.8 原核表达载体pRX4与目的片段连接 | 第28-29页 |
| 2.2.9 大肠杆菌DH5 α化转感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 2.2.10 连接产物的转化 | 第29-30页 |
| 2.2.11 阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第30页 |
| 2.2.12 重组质粒转化至表达宿主菌 | 第30页 |
| 2.2.13 表达蛋白的SDS-PAGE分析 | 第30-31页 |
| 2.3 结果分析 | 第31-46页 |
| 2.3.1 不同数量的精氨酸密码子对蛋白表达的影响 | 第31-34页 |
| 2.3.2 不同的密码子对蛋白表达的影响 | 第34-39页 |
| 2.3.3 密码子对N-乙酰葡萄糖胺差向异构酶表达的影响 | 第39-42页 |
| 2.3.4 弱启动子控制下密码子对N-乙酰神经氨酸醛缩酶表达的影响 | 第42-46页 |
| 2.4 讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 克隆表达不同微生物来源的N-乙酰神经氨酸醛缩酶以及N-乙酰葡萄糖胺差向异构酶的酶学性质分析 | 第48-68页 |
| 3.1 材料、仪器与试剂 | 第48-49页 |
| 3.1.1 材料 | 第48页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第48页 |
| 3.1.3 培养基和溶液 | 第48-49页 |
| 3.1.4 生化试剂 | 第49页 |
| 3.2 方法 | 第49-54页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第49页 |
| 3.2.2 菌的培养及细菌基因组的提取 | 第49-50页 |
| 3.2.3 不同来源的N-乙酰神经氨酸醛缩酶基因扩增与载体构建 | 第50页 |
| 3.2.4 重组蛋白的高密度自诱导表达与纯化 | 第50页 |
| 3.2.5 BCA法蛋白浓度测定 | 第50-51页 |
| 3.2.6 目的蛋白酶活测定 | 第51-52页 |
| 3.2.7 pEcNA/TL001,pSaNA/TL001,pSmNA/TL001,pPaNA/TL001,pSdNA/TL001的转化 | 第52-53页 |
| 3.2.8 目的蛋白酶学性质分析 | 第53-54页 |
| 3.3 结果与分析 | 第54-66页 |
| 3.3.1 不同微生物来源的N-乙酰神经氨酸醛缩酶的扩增与载体构建 | 第54-59页 |
| 3.3.3 蛋白浓度测定及产物标准曲线制作 | 第59-60页 |
| 3.3.4 N-乙酰神经氨酸醛缩酶的比活力 | 第60-61页 |
| 3.3.5 pEcNA/TL001,pSaNA/TL001,pSmNA/TL001,pPaN/A/TL001,pSdNA/TL001的转化 | 第61-63页 |
| 3.3.6 N-乙酰神经氨酸醛缩酶及N-乙酰葡萄糖胺差向异构酶的酶学性质分析 | 第63-66页 |
| 3.4 讨论 | 第66-68页 |
| 第四章 结论 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 在校期间发表论文 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
