摘要 | 第3-9页 |
ABSTRACT | 第9-16页 |
1 前言 | 第20-28页 |
2 材料与方法 | 第28-44页 |
2.1 实验材料 | 第28-31页 |
2.1.1 实验动物与实验细胞 | 第28页 |
2.1.2 主要实验仪器 | 第28-29页 |
2.1.3 主要实验耗材 | 第29-30页 |
2.1.4 主要实验试剂 | 第30-31页 |
2.2 主要溶液配制 | 第31-32页 |
2.3 细胞培养 | 第32-34页 |
2.3.1 原代细胞培养 | 第32-33页 |
2.3.2 THP1细胞培养 | 第33-34页 |
2.4 CCK-8细胞毒性增殖试验 | 第34-35页 |
2.5 实验分组及给药 | 第35-36页 |
2.6 ELISA检测细胞上清TNF-α表达 | 第36-37页 |
2.7 western blot检测EGFR、ERK1/2和P38磷酸化蛋白水平 | 第37-39页 |
2.7.1 收集蛋白样品 | 第37页 |
2.7.2 蛋白定量 | 第37-38页 |
2.7.3 蛋白变性 | 第38页 |
2.7.4 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第38-39页 |
2.8 siRNA基因沉默EGFR和HER2表达 | 第39-40页 |
2.8.1 EGFR和HER2的siRNA oligo序列 | 第39-40页 |
2.8.2 siRNA转染及给药 | 第40页 |
2.9 PCR检测细胞EGFR和HER2表达水平 | 第40-43页 |
2.9.1 总RNA提取 | 第40-41页 |
2.9.2 反转录PCR | 第41-42页 |
2.9.3 荧光实时定量PCR(Q-PCR) | 第42-43页 |
2.10 统计学分析 | 第43-44页 |
3 实验结果 | 第44-54页 |
3.1 HMGB1刺激THP1细胞磷酸化EGFR蛋白表达 | 第44页 |
3.2 PD168393和Erlotinib对THP1细胞毒性的影响 | 第44-45页 |
3.3 细胞HMGB1给药对细胞活力的影响 | 第45-46页 |
3.4 EGFR抑制剂对HMGB1诱导THP1细胞的TNF-α生成的影响 | 第46-48页 |
3.5 EGFR抑制剂对HMGB1诱导BMM细胞的TNF-α生成的影响 | 第48-49页 |
3.6 正常THP1细胞中EGFR和HER2的mRNA表达比较 | 第49-50页 |
3.7 THP1细胞EGFR和HER2 siRNA转染效率 | 第50-51页 |
3.8 EGFR和HER2 siRNA对HMGB1诱导的TNF-α表达的影响 | 第51-52页 |
3.9 HMGB1对MAPK信号通路中ERK1/2和P38磷酸化的影响 | 第52-54页 |
4 讨论 | 第54-60页 |
5 结论 | 第60-61页 |
参考文献 | 第61-68页 |
综述 | 第68-78页 |
参考文献 | 第75-78页 |
英文缩略语名词对照表 | 第78-79页 |
攻读学位期间的成果 | 第79-80页 |
致谢 | 第80-81页 |