| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 第一篇 文献综述 | 第14-46页 |
| 第一章 肌苷酸及其相关酶的研究概况 | 第14-32页 |
| 1 肌苷酸结构与特性 | 第14-15页 |
| ·肌苷酸分子结构 | 第14页 |
| ·肌苷酸特性 | 第14-15页 |
| 2 肌苷酸的代谢 | 第15页 |
| ·肌苷酸的合成 | 第15页 |
| ·肌苷酸代谢过程中的酶 | 第15页 |
| 3 肌苷酸代谢相关的酶以及酶的基因研究 | 第15-24页 |
| ·谷氨酸胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶(GAPTase) | 第15-16页 |
| ·甘氨酰胺核苷酸合成酶-氨基咪唑核苷酸合成酶-甘氨酰胺核苷酸转甲酰基酶(GARS-AIRS-GART) | 第16-18页 |
| ·甲酰甘氨脒核苷酸合成酶(purL或purLQS) | 第18页 |
| ·氨基咪唑核苷酸羧化酶(purE Ⅱ或purK和purEⅠ) | 第18-19页 |
| ·氨基咪唑琥珀基氨甲酰核苷酸(SAICAR)合成酶(purC) | 第19页 |
| ·腺苷酸琥珀酸裂解酶(purB或ADSL) | 第19-20页 |
| ·氨基咪唑氨甲酰核苷酸转甲酰基酶(PurHJ) | 第20-24页 |
| ·腺嘌呤核苷酸脱氨酶(AMPD) | 第24页 |
| 4 肌苷酸检测技术 | 第24-25页 |
| 5 IMP含量的调控 | 第25页 |
| 6 肌苷酸研究展望 | 第25-27页 |
| 参考文献 | 第27-32页 |
| 第二章 基因的克隆及生物信息学分析 | 第32-46页 |
| 1 克隆基因的几种常用方法 | 第32-37页 |
| ·利用已知探针克隆基因 | 第32页 |
| ·克隆未知序列的基因 | 第32-33页 |
| ·随机引物法克隆未知序列基因 | 第32页 |
| ·差异显示PCR(DD-PCR) | 第32-33页 |
| ·差减杂交PCR(RDA-PCR) | 第33页 |
| ·用特异抗体克隆基因 | 第33页 |
| ·特异基因的功能克隆 | 第33-34页 |
| ·染色体步技术 | 第34-35页 |
| ·EST电子克隆及RACE技术的应用 | 第35-37页 |
| ·EST电子克隆 | 第35-36页 |
| ·RACE技术的原理 | 第36-37页 |
| ·3’RACE的获得 | 第36-37页 |
| ·5’RACE的获得 | 第37页 |
| 2 核酸序列分析 | 第37-38页 |
| ·ORF(Open Reading Frame)分析 | 第37-38页 |
| ·染色体定位 | 第38页 |
| ·基因结构分析 | 第38页 |
| ·基因上游调控区分析 | 第38页 |
| 3 蛋白质结构分析和功能预测 | 第38-41页 |
| ·蛋白质氨基酸组成、分子量和等电点分析 | 第39页 |
| ·疏水性分析 | 第39页 |
| ·信号肽预测 | 第39-40页 |
| ·跨膜区预测 | 第40页 |
| ·亚细胞定位预测 | 第40页 |
| ·蛋白质功能结构域分析 | 第40-41页 |
| ·蛋白质多序列比对和分子系统发生分析 | 第41页 |
| 4 小结 | 第41-42页 |
| 5 本试验研究目的和意义 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-46页 |
| 第二篇 实验研究 | 第46-94页 |
| 第三章 鸭ADSL与PurH基因编码区的克隆测序 | 第46-58页 |
| 1 材料与方法 | 第46-54页 |
| ·材料 | 第46-48页 |
| ·实验动物与样品采集 | 第46-47页 |
| ·网络资源及软件 | 第47页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第47-48页 |
| ·RNA提取试剂配制 | 第47-48页 |
| ·琼脂糖电泳试剂配制 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-54页 |
| ·引物设计 | 第48-49页 |
| ·RT-PCR扩增目的区 | 第49-51页 |
| ·肌肉组织总RNA抽提 | 第49页 |
| ·RNA浓度和纯度检测 | 第49-50页 |
| ·RNA完整性检测 | 第50页 |
| ·第一链cDNA合成 | 第50-51页 |
| ·PCR扩增ORF区 | 第51页 |
| ·琼脂糖电泳检测 | 第51页 |
| ·琼脂糖电泳检测 | 第51页 |
| ·cDNA克隆测序 | 第51-54页 |
| ·目的片断回收和纯化 | 第51-52页 |
| ·快速TOP10感受态制备 | 第52页 |
| ·连接反应 | 第52页 |
| ·转化 | 第52-53页 |
| ·菌落筛选 | 第53页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第53页 |
| ·质粒抽提 | 第53-54页 |
| ·测序 | 第54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-55页 |
| ·鸭ADSL基因CDS区的核酸序列分析 | 第54页 |
| ·鸭PurH基因CDS区的核酸序列分析 | 第54-55页 |
| 3 讨论 | 第55-56页 |
| 4 小结 | 第56-58页 |
| 第四章 蛋白质序列的生物信息学分析 | 第58-72页 |
| 1 材料与方法 | 第58-60页 |
| ·材料 | 第58页 |
| ·方法 | 第58-60页 |
| ·蛋白质氨基酸组成、分子量和等电点分析 | 第58页 |
| ·蛋白质疏水性分析 | 第58-59页 |
| ·蛋白质信号肽预测 | 第59页 |
| ·跨膜区预测 | 第59页 |
| ·亚细胞定位预测 | 第59页 |
| ·蛋白质功能位点和结构域预测 | 第59-60页 |
| ·蛋白质氨基酸序列间的多重比对和分子系统发生分析 | 第60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-67页 |
| ·ADSL和PurH蛋白质组成、基本理化性质、疏水性和信号肽分析 | 第60-63页 |
| ·鸭ADSL和PurH蛋白质功能位点、二级结构以及三级结构预测 | 第63-66页 |
| ·同源性比较与系统发育树分析 | 第66-67页 |
| 3 讨论 | 第67-69页 |
| 4 小结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-72页 |
| 第五章 鸭ADSL和PurH基因mRNA在胸肌和腿肌中的表达分析 | 第72-82页 |
| 1. 材料与方法 | 第72-74页 |
| ·材料 | 第72-73页 |
| ·试验动物 | 第72页 |
| ·主要试剂 | 第72页 |
| ·主要仪器 | 第72页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第72-73页 |
| ·试验方法 | 第73-74页 |
| ·引物设计 | 第73页 |
| ·总RNA抽提 | 第73页 |
| ·RNA浓度和纯度检测 | 第73页 |
| ·第一链cDNA合成 | 第73页 |
| ·cDNA质量检测 | 第73-74页 |
| ·Real-time PCR | 第74页 |
| ·20 μl反应体系 | 第74页 |
| ·反应程序 | 第74页 |
| ·数据处理 | 第74页 |
| 2 结果与分析 | 第74-77页 |
| ·ADSL基因mRNA表达量分析 | 第74-75页 |
| ·PurH基因mRNA表达量分析 | 第75-77页 |
| 3 讨论 | 第77-79页 |
| ·内参基因的选择 | 第77页 |
| ·各种RT-PCR方法的比较 | 第77-78页 |
| ·ADSL和PurH基因mRNA的相对表达分析 | 第78-79页 |
| 4 小结 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-82页 |
| 第六章 鸭肌肉肌苷酸含量的测定与分析 | 第82-88页 |
| 1. 材料与方法 | 第82-83页 |
| ·材料与试剂 | 第82页 |
| ·主要溶液配制 | 第82页 |
| ·PH=7.0的50mmol/l硼酸缓冲溶液配制 | 第82页 |
| ·流动相配制 | 第82页 |
| ·IMP标准溶液配制 | 第82页 |
| ·仪器与设备 | 第82页 |
| ·样品制备 | 第82-83页 |
| ·色谱分离条件 | 第83页 |
| 2. 结果 | 第83-84页 |
| 3. 讨论 | 第84-85页 |
| 4 小结 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-88页 |
| 第七章 鸭ADSL和PurH基因mRNA表达量与肌苷酸含量的相关性分析 | 第88-94页 |
| 1. 材料 | 第88页 |
| 2. 结果 | 第88-89页 |
| ·ADSL基因mRNA表达量与肌肉IMP含量的相关性分析 | 第88-89页 |
| ·PurH基因mRNA表达量与肌肉IMP含量的相关性分析 | 第89页 |
| 3. 讨论 | 第89-91页 |
| 4 小结 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-94页 |
| 全文结论 | 第94-96页 |
| 附录 | 第96-98页 |
| 致谢 | 第98-100页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第100页 |
