| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 1 引言 | 第11-20页 |
| 1.1 枯草芽孢杆菌的概述 | 第11页 |
| 1.2 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第11-17页 |
| 1.2.1 枯草芽孢杆菌表达系统的发展 | 第11页 |
| 1.2.2 枯草芽孢杆菌表达系统的特点 | 第11-12页 |
| 1.2.3 枯草芽孢杆菌表达系统的载体 | 第12-14页 |
| 1.2.4 枯草芽孢杆菌表达系统的启动子 | 第14-17页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌表面展示系统 | 第17-18页 |
| 1.3.1 芽孢的结构和组成 | 第17页 |
| 1.3.2 枯草芽孢杆菌芽孢特性 | 第17-18页 |
| 1.3.3 B. subtilis 芽孢作为全细胞催化剂载体的研究 | 第18页 |
| 1.3.4 枯草芽孢杆菌芽孢作为口服疫苗载体的研究 | 第18页 |
| 1.4 本研究的意义和主要内容 | 第18-20页 |
| 1.4.1 本研究的意义 | 第18-19页 |
| 1.4.2 本实验的研究内容 | 第19-20页 |
| 2 材料和方法 | 第20-37页 |
| 2.1 酶与生化试剂 | 第20页 |
| 2.2 菌株与质粒 | 第20-21页 |
| 2.3 主要的培养基及相关溶液的配置 | 第21-22页 |
| 2.4 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.5 穿梭表达载体 pTL 的构建及表达能力的检测 | 第23-31页 |
| 2.5.1 融合 PCR 引物设计 | 第23页 |
| 2.5.2 B. subtilis 168 基因组提取 | 第23-24页 |
| 2.5.3 融合片段扩增 | 第24-25页 |
| 2.5.4 质粒 pHT315 平端化 | 第25页 |
| 2.5.5 穿梭表达载体 pTL 的构建 | 第25-26页 |
| 2.5.6 重组质粒 pTL-gfp 构建 | 第26页 |
| 2.5.7 重组质粒 pTL-gus 的构建 | 第26页 |
| 2.5.8 重组质粒 pTL-APPsw 的构建 | 第26页 |
| 2.5.9 重组质粒 pTL-lipa 的构建 | 第26-27页 |
| 2.5.10 重组质粒 pTL-gfp，pTL-gus，pTL-APPsw，pTL-lipa 转化 B. subtilis WB80017 | 第27-28页 |
| 2.5.11 工程菌 WB800-gfp 中 GFP 的表达 | 第28页 |
| 2.5.12 以 gfp 基因为报告基因优化载体 pTL 的诱导条件 | 第28页 |
| 2.5.13 工程菌 WB800-gus 中 GUS 的表达 | 第28-29页 |
| 2.5.14 工程菌 WB800-APPsw 中 APPsw 的表达 | 第29-30页 |
| 2.5.15 工程菌 WB800-lipa 中脂肪酶活性的测定 | 第30-31页 |
| 2.5.16 质粒稳定性实验 | 第31页 |
| 2.6 穿梭表达载体 pDG148-Stu 改造及表达能力的验证 | 第31-34页 |
| 2.6.1 引物设计 | 第31页 |
| 2.6.2 穿梭表达载体 pDG150 的构建 | 第31-32页 |
| 2.6.3 重组质粒 pDG150-gfp 的构建 | 第32页 |
| 2.6.4 重组质粒 pDG150-gus 的构建 | 第32-33页 |
| 2.6.5 重组质粒 pDG150-APPsw 的构建 | 第33页 |
| 2.6.6 重组质粒 pDG150-lipa 的构建 | 第33页 |
| 2.6.7 重组质粒 pDG150-gfp，pDG150-gus，pDG150-APPsw，pDG150-lipa 转化 B. subtilis 168 | 第33页 |
| 2.6.8 工程菌 B168-gfp 中 GFP 的表达 | 第33页 |
| 2.6.9 以 gfp 为报告基因优化载体 pDG150 的诱导条件 | 第33-34页 |
| 2.6.10 工程菌 B168-gus，B168-APPsw，B168-lipa 中 GUS，APPsw，脂肪酶酶活的检测 | 第34页 |
| 2.6.11 质粒稳定检测 | 第34页 |
| 2.7 表面展示载体 pDG150-cotg 的构建 | 第34-37页 |
| 2.7.1 引物设计 | 第34-35页 |
| 2.7.2 cotg 基因的克隆和表面展示载体 pDG150-cotg 的构建 | 第35页 |
| 2.7.3 重组质粒 pDG150-cotg-gfp ， pDG150-cotg-gus ， pDG150-cotg-APPsw ，G150-cotg-lipa 的构建 | 第35页 |
| 2.7.4 重组质粒 pDG150-cotg-gfp ， pDG150-cotg-gus ， pDG150-cotg-APPsw ，pDG150-cotg-lipa 转化 B. subtilis 168 | 第35页 |
| 2.7.5 gfp 基因，gus 基因，APPsw 基因，lipa 基因在工程菌 G168，U168，A168，L168 芽孢表面的展示表达 | 第35-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-57页 |
| 3.1 穿梭表达载体 pTL 的构建及表达能力的检测 | 第37-45页 |
| 3.1.1 穿梭表达载体 pTL 的构建 | 第37-39页 |
| 3.1.2 重组质粒 pTL-gfp，pTL-gus，pTL-APPsw，pTL-lipa 构建 | 第39-40页 |
| 3.1.3 重组质粒 pTL-gfp，pTL-gus，pTL-APPsw，pTL-lipa 转化 B. subtilis WB80030 | 第40-41页 |
| 3.1.4 工程菌 WB800-gfp 的 GFP 蛋白的表达 | 第41-42页 |
| 3.1.5 以 gfp 基因为报告基因优化载体 pTL 的诱导条件 | 第42-43页 |
| 3.1.6 重组工程菌 WB800-gus 的 GUS 表达检测 | 第43页 |
| 3.1.7 工程菌 WB800-APPsw 中 APPsw 的表达 | 第43-44页 |
| 3.1.8 工程菌 WB800-lipa 中脂肪酶的表达 | 第44页 |
| 3.1.9 质粒稳定性检测 | 第44-45页 |
| 3.2 穿梭表达载体 pDG150 构建及表达能力的验证 | 第45-52页 |
| 3.2.1 穿梭表达载体 pDG150 的构建 | 第45-46页 |
| 3.2.2 重组质粒 pDG150-gfp，pDG150-gus，pDG150-APPsw，pDG150-lipa 的构建 | 第46-48页 |
| 3.2.3 重组质粒 pDG150-gfp ， pDG150-gus ， pDG150-APPsw ， pDG150-lipa 转化 Bsubtilis16838 | 第48-49页 |
| 3.2.4 工程菌 B168-gfp 的 GFP 的检测 | 第49-50页 |
| 3.2.5 以 gfp 为报告基因优化载体 pDG150 的诱导条件 | 第50页 |
| 3.2.6 工程菌 B168-gus 的 GUS 的检测 | 第50-51页 |
| 3.2.7 工程菌 B168-APPsw 的 APPsw 的检测 | 第51页 |
| 3.2.8 工程菌 B168-lipa 的脂肪酶酶活测定 | 第51页 |
| 3.2.9 质粒 pDG150 稳定性试验 | 第51-52页 |
| 3.3 表面展示载体 pDG150-cotg 的构建 | 第52-57页 |
| 3.3.1 表面展示载体 pDG150-cotg 构建流程图 | 第52页 |
| 3.3.2 芽孢衣壳蛋白基因（cotg）的克隆和表面展示载体 pDG150-cotg 的构建 | 第52-53页 |
| 3.3.3 重组质粒 pDG150-cotg-gfp ， pDG150-cotg-gus ， pDG150-cotg-APPsw ，pDG150-cotg-lipa 的构建 | 第53-54页 |
| 3.3.4 重组质粒 pDG150-cotg-gfp ， pDG150-cotg-gus ， pDG150-cotg-APPsw ， pDG150-cotglipa 转化 B. subtillis 168 | 第54-55页 |
| 3.3.5 gfp 基因，gus 基因，APPsw 基因，lipa 基因在工程菌 G168，U168，A168，L168 芽孢表面的展示表达 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 4.1 枯草芽孢杆菌穿梭表达载体 | 第57页 |
| 4.2 枯草芽孢杆菌表面展示 | 第57-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第65-66页 |
| 附件 | 第66-73页 |
| 作者简历 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
