| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第14-30页 |
| 1.1 ε-PL的结构及理化性质 | 第14-15页 |
| 1.2 ε-PL的应用及研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2.1 ε-PL在食品产业中的应用 | 第15-16页 |
| 1.2.2 ε-PL及其衍生物的其他应用 | 第16-17页 |
| 1.3 ε-PL的抑菌效果 | 第17-20页 |
| 1.3.1 ε-PL的抑菌机制及抑菌范围 | 第17-19页 |
| 1.3.2 ε-PL的生物安全性 | 第19页 |
| 1.3.3 不同聚合度 ε-PL的抑菌性 | 第19-20页 |
| 1.4 ε-PL的生物合成研究 | 第20-23页 |
| 1.4.1 ε-PL生物合成中相关的酶及基因 | 第20-21页 |
| 1.4.2 聚赖氨酸合成酶(Pls)的结构特征 | 第21-22页 |
| 1.4.3 ε-PL的生物合成过程 | 第22-23页 |
| 1.5 ε-PL的聚合度控制研究 | 第23-25页 |
| 1.5.1 Pls对 ε-PL聚合度的控制研究 | 第23-24页 |
| 1.5.2 培养基改变对 ε-PL聚合度的调控 | 第24-25页 |
| 1.6 ε-PL产生菌的介绍 | 第25-28页 |
| 1.6.1 ε-PL产生菌的筛选 | 第25-26页 |
| 1.6.2 ε-PL产生菌的发酵及其产物 ε-PL纯化 | 第26-27页 |
| 1.6.3 不同聚合度 ε-PL产生菌的介绍 | 第27-28页 |
| 1.7 本论文的立题依据及主要研究内容 | 第28-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-37页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第30-31页 |
| 2.1.2 培养基及化学试剂 | 第31-34页 |
| 2.1.3 所用试剂、标品及酶 | 第34页 |
| 2.1.4 引物 | 第34-37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-48页 |
| 2.2.1 大肠杆菌的培养与保藏 | 第37页 |
| 2.2.2 链霉菌的培养与保藏 | 第37页 |
| 2.2.3 DNA及RNA的提取与操作 | 第37-40页 |
| 2.2.4 常规PCR扩增 | 第40-42页 |
| 2.2.5 重叠延伸PCR (Splicing by Overlapping Extension PCR, SOE-PCR) | 第42页 |
| 2.2.6 质粒DNA通过接合转移从大肠杆菌转入至链霉菌 | 第42-43页 |
| 2.2.7 同源双交换法对链霉菌基因的敲除 | 第43页 |
| 2.2.8 ε-PL的摇瓶发酵 | 第43页 |
| 2.2.9 ε-PL的发酵罐发酵 | 第43-44页 |
| 2.2.10 离子交换法处理发酵产物 | 第44-45页 |
| 2.2.11 分光光度法测定 ε-PL的浓度 | 第45页 |
| 2.2.12 HPLC检测 ε-PL | 第45页 |
| 2.2.13 生物信息学方法对Pls的预测及分析 | 第45-48页 |
| 第三章 聚赖氨酸合成酶(Pls)的生物信息学预测 | 第48-56页 |
| 3.1 Pls的预测结果及进化分析 | 第49-53页 |
| 3.2 Pls中不同结构域的进化分析 | 第53-54页 |
| 3.3 小结 | 第54-56页 |
| 第四章S. cattleya DSM 46488 中 ε-PL生物合成的研究 | 第56-74页 |
| 4.1 S. cattleya DSM 46488 中产 ε-PL的检测 | 第56-58页 |
| 4.2 S. cattleya DSM 46488 中 ε-PL合成酶基因pls和其转录情况 | 第58-60页 |
| 4.3 S. cattleya DSM 46488 中 ε-PL合成酶基因pls的缺失突变研究 | 第60-67页 |
| 4.3.1 pls基因敲除载体的构建 | 第60-62页 |
| 4.3.2 S. cattleya DSM 46488 中染色体上pls的缺失 | 第62-63页 |
| 4.3.3 S. cattleya DSM 46488 中质粒上pls的缺失 | 第63-64页 |
| 4.3.4 S. cattleya DSM 46488 中两个pls基因的双缺失 | 第64-65页 |
| 4.3.5 S. cattleya DSM 46488 中pls缺失突变株产 ε-PL的检测 | 第65-66页 |
| 4.3.6 S. cattleya DSM 46488 中pls的回补实验 | 第66-67页 |
| 4.4 S. cattleya DSM 46488 中pls在S. diastatochromogenes CGMCC3145中的异源表达 | 第67-70页 |
| 4.4.1 pls异源表达菌株的构建 | 第68-69页 |
| 4.4.2 pls异源表达菌株发酵产物的检测 | 第69-70页 |
| 4.5 S. cattleya DSM 46488 中pls在Streptomyces lividans中异源表达的尝试 | 第70-73页 |
| 4.5.1 pls 异源表达菌株的构建 | 第70-71页 |
| 4.5.2 pls异源表达菌株发酵产物的检测 | 第71-73页 |
| 4.6 小结 | 第73-74页 |
| 第五章 ε-PL聚合度控制机制的初步研究 | 第74-81页 |
| 5.1 组合型Pls的构建与分析 | 第74-76页 |
| 5.2 Pls结构域的多序列比对 | 第76-80页 |
| 5.3 小结 | 第80-81页 |
| 第六章 总结与展望 | 第81-83页 |
| 6.1 总结 | 第81-82页 |
| 6.2 展望 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-91页 |
| 附录 | 第91-99页 |
| 致谢 | 第99-101页 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 | 第101页 |
