| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9页 |
| 1 前言 | 第10-15页 |
| 1.1 病原 | 第10-11页 |
| 1.1.1 病毒基因组与编码蛋白 | 第10页 |
| 1.1.2 IBRV的生物学特性 | 第10-11页 |
| 1.2 流行病学 | 第11-12页 |
| 1.3 防治 | 第12页 |
| 1.4 牛传染性鼻气管炎病毒g B蛋白研究进展 | 第12-14页 |
| 1.4.1 g B蛋白的结构特征 | 第12-13页 |
| 1.4.2 g B蛋白的生物学功能 | 第13页 |
| 1.4.3 g B蛋白在免疫学方面的研究 | 第13-14页 |
| 1.4.4 g B蛋白在诊断方面的研究 | 第14页 |
| 1.5 研究的目的和意义 | 第14-15页 |
| 2 材料和方法 | 第15-25页 |
| 2.1 材料 | 第15-16页 |
| 2.1.1 毒株、质粒和血清 | 第15页 |
| 2.1.2 主要酶类及试剂 | 第15页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第15-16页 |
| 2.2 方法 | 第16-25页 |
| 2.2.1 表位的选择及引物的设计 | 第16页 |
| 2.2.2 PCR反应扩增目的片段 | 第16-18页 |
| 2.2.3 表达载体p ET-30a-g B(190-524)的构建 | 第18-19页 |
| 2.2.4 蛋白的原核表达和鉴定 | 第19-21页 |
| 2.2.5 牛IBRV抗体间接ELISA检测方法的标准化 | 第21-22页 |
| 2.2.6 间接ELISA反应时间确定 | 第22-23页 |
| 2.2.7 判定标准试验 | 第23页 |
| 2.2.8 特异性试验 | 第23页 |
| 2.2.9 敏感性实验 | 第23页 |
| 2.2.10 重复性试验 | 第23页 |
| 2.2.11 符合性试验 | 第23-24页 |
| 2.2.12 牛传染性鼻气管炎血清学调查 | 第24-25页 |
| 3 结果 | 第25-35页 |
| 3.1 目的基因的克隆 | 第25-26页 |
| 3.1.1 PCR扩增 | 第25页 |
| 3.1.2 重组表达质粒的酶切鉴定 | 第25-26页 |
| 3.2 重组蛋白的表达与纯化 | 第26-27页 |
| 3.2.1 重组蛋白的表达 | 第26页 |
| 3.2.2 重组蛋白的Western blot鉴定 | 第26-27页 |
| 3.2.3 重组蛋白的纯化 | 第27页 |
| 3.3 间接ELISA反应条件的确定 | 第27-35页 |
| 3.3.1 最佳抗原包被浓度和最佳血清稀释度的确定 | 第27-28页 |
| 3.3.2 最适包被缓冲液的选择 | 第28页 |
| 3.3.3 最佳封闭液的选择 | 第28-29页 |
| 3.3.4 最佳血清稀释液的选择 | 第29页 |
| 3.3.5 酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第29-30页 |
| 3.3.6 间接ELISA反应时间确定 | 第30-31页 |
| 3.3.7 间接ELISA检测方法临界值的确定 | 第31-32页 |
| 3.3.8 特异性试验 | 第32页 |
| 3.3.9 敏感性试验 | 第32-33页 |
| 3.3.10 重复性试验 | 第33页 |
| 3.3.11 符合性试验 | 第33页 |
| 3.3.12 临床样本监测结果 | 第33-35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 4.1 IBR g B(190-524)间接ELISA诊断方法的初步应用及前景分析 | 第35页 |
| 4.2 IBR g B(190-524)间接ELISA反应条件的优化 | 第35-36页 |
| 4.3 对黑龙江省血清检测结果的分析 | 第36-37页 |
| 5 结论 | 第37-38页 |
| 致谢 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-41页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第41页 |
