| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 综述部分 | 第15-46页 |
| 1 泛素蛋白酶体途径 | 第15-21页 |
| 1.1 Ub化蛋白 | 第15-16页 |
| 1.2 泛素链 | 第16页 |
| 1.3 泛素样蛋白 | 第16-17页 |
| 1.4 包含泛素样区域(Ubiquitin-like domain,UbLD)-的蛋白质 | 第17页 |
| 1.5 Ub酶 | 第17-19页 |
| 1.6 额外的泛素蛋白E4s | 第19-20页 |
| 1.7 泛素结合特异性的实现:E2和E3组合编码 | 第20-21页 |
| 2 UPP基本构成 | 第21-28页 |
| 2.1 26S蛋白酶体和它在UPP中的作用 | 第22-23页 |
| 2.2 20S核心颗粒(CP)的结构和作用 | 第23-24页 |
| 2.3 开启20S催化核心进入的通道 | 第24-25页 |
| 2.4 19S调节粒子的整体结构 | 第25-28页 |
| 3 Ub修饰 | 第28-31页 |
| 3.1 Ub化的研究 | 第28-29页 |
| 3.2 泛素链信号的新见解 | 第29-31页 |
| 4 泛素识别:许多细胞内过程的一个关键机械组件 | 第31-37页 |
| 4.1 来自高度保守泛素的功能上不同的信号 | 第31-32页 |
| 4.2 主要的UPP降解受体 | 第32页 |
| 4.3 主要泛素受体的跨物种分化 | 第32-34页 |
| 4.4 泛素UPP底物的识别机制 | 第34页 |
| 4.5 UPP底物识别的调控 | 第34-35页 |
| 4.6 泛素链信号的组装和调控 | 第35页 |
| 4.7 泛素受体识别泛素链的直接抑制 | 第35页 |
| 4.8 分子内相互作用的自动抑制 | 第35页 |
| 4.9 主要泛素受体的同源二聚体和异源二聚体 | 第35-36页 |
| 4.10 UBL-UBA因子的蛋白酶体识别 | 第36页 |
| 4.11 确定泛素底物特异性识别步骤的机制 | 第36-37页 |
| 5 Ub在受精卵识别过程中的作用 | 第37-40页 |
| 5.1 Ub在精子获能、AR中的作用 | 第37-38页 |
| 5.2 Ub在精卵识别中的作用 | 第38-40页 |
| 6 卵母细胞成熟发育 | 第40-44页 |
| 6.1 哺乳动物的卵母细胞成熟 | 第41页 |
| 6.2 卵母细胞ZP结构 | 第41-44页 |
| 7 体细胞核移植 | 第44页 |
| 8 本实验的研究目的与意义及创新点 | 第44-46页 |
| 8.1 研究目的与意义 | 第44-45页 |
| 8.2 本实验的创新点 | 第45-46页 |
| 第二章 PPi对精子保存的影响及E2和DBUs抑制剂对精子获能与AR后Ub蛋白程度的影响 | 第46-78页 |
| 1 前言 | 第46-47页 |
| 2 实验材料与方法 | 第47-55页 |
| 2.1 实验所用仪器及药品 | 第47-49页 |
| 2.2 药品配置 | 第49-52页 |
| 2.3 实验方法 | 第52-55页 |
| 2.3.1 精子的常规检查 | 第52页 |
| 2.3.2 精子的预处理 | 第52-53页 |
| 2.3.3 未成熟精子的预处理 | 第53页 |
| 2.3.4 精子获能 | 第53页 |
| 2.3.5 诱导精子AR | 第53页 |
| 2.3.6 精子蛋白的提取 | 第53页 |
| 2.3.7 精清蛋白的提取 | 第53页 |
| 2.3.8 猪卵泡液的获取 | 第53页 |
| 2.3.9 卵泡液蛋白的提取 | 第53-54页 |
| 2.3.10 未成熟猪精子的获取 | 第54页 |
| 2.3.11 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第54页 |
| 2.3.12 免疫印迹(Western blotting,WB) | 第54-55页 |
| 2.3.13 ECL染色 | 第55页 |
| 2.3.14 数据的统计分析 | 第55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-72页 |
| 3.1 PPi对精子生物学参数的影响 | 第55-61页 |
| 3.2 成熟精子及其对应精清、未成熟精子及其对应精清中Ub蛋白的含量分析 | 第61-62页 |
| 3.3 不同直径卵泡中Ub蛋白含量 | 第62-64页 |
| 3.4 不同时期黄体中泛素蛋白含量分析 | 第64页 |
| 3.5 猪卵丘细胞中Ub蛋白分析 | 第64页 |
| 3.6 添加不同的E2抑制剂对精子获能后AI、PSMD4、Ub蛋白表达的影响 | 第64-66页 |
| 3.7 添加不同浓度E2抑制剂对诱导精子AR后AI、PSMD4、Ub蛋白表达的影响 | 第66-68页 |
| 3.8 添加不同浓度DUBs抑制剂对精子获能后AI、PSMD4、Ub蛋白表达的影响 | 第68-70页 |
| 3.9 添加不同浓度DUBs抑制剂对诱导精子AR后AI、PSMD4、Ub蛋白表达的影响 | 第70-72页 |
| 4 讨论 | 第72-76页 |
| 5 小结 | 第76-78页 |
| 第三章 PPi、E2和DUBs抑制剂对猪卵母细胞泛素化水平的影响 | 第78-103页 |
| 1 前言 | 第78-79页 |
| 2 材料与方法 | 第79-83页 |
| 2.1 实验所用仪器及药品 | 第79-80页 |
| 2.2 药品的配制 | 第80-82页 |
| 2.3 试验步骤 | 第82-83页 |
| 3 结果与分析 | 第83-96页 |
| 3.1 卵母细胞成熟分析 | 第83-84页 |
| 3.2 不同直径的卵泡中卵母细胞成熟率分析 | 第84页 |
| 3.3 不同直径卵泡中成熟卵母细胞ZP蛋白泛素化水平分析 | 第84-85页 |
| 3.4 添加不同浓度PPi分别培养44、46、48、50对h猪卵母细胞成熟率的影响 | 第85-86页 |
| 3.5 添加不同浓度PPi分别培养44、46、48、50 h对猪卵母细胞ZP蛋白泛素化水平的影响 | 第86-88页 |
| 3.6 添加E2抑制剂培养44 h对卵母细胞成熟的影响 | 第88-89页 |
| 3.7 添加不同浓度E2抑制剂分别培养44、46、48、50 h对猪卵母细胞成熟率的影响 | 第89-90页 |
| 3.8 添加不同浓度E2抑制剂分别培养44、46、48、50 h对猪成熟卵母细胞ZP蛋白泛素化水平的影响 | 第90-92页 |
| 3.9 添加DUBs抑制剂对卵母细胞成熟影响 | 第92-93页 |
| 3.10 添加不同浓度DUBs抑制剂分别培养44、46、48、50 h对猪卵母细胞成熟率的影响 | 第93-94页 |
| 3.11 添加不同浓度DUBs抑制剂分别培养44、46、48、50 h对猪卵母细胞ZP蛋白泛素化水平的影响 | 第94-96页 |
| 4 讨论 | 第96-102页 |
| 5 小结 | 第102-103页 |
| 第四章 PPi、E2、DUBs抑制剂对猪多精入卵的影响 | 第103-112页 |
| 1 前言 | 第103页 |
| 2 材料与方法 | 第103-104页 |
| 2.1 试验所用仪器 | 第103页 |
| 2.2 实验药品配置 | 第103-104页 |
| 2.3 实验方法 | 第104页 |
| 3 结果与分析 | 第104-108页 |
| 3.1 ZP硬化 | 第104页 |
| 3.2 不同浓度PPi对卵母细胞ZP硬化的影响 | 第104-105页 |
| 3.3 不同浓度E2抑制剂对卵母细胞ZP硬化的影响 | 第105页 |
| 3.4 不同浓度DUBs抑制剂对卵母细胞ZP硬化的影响 | 第105-106页 |
| 3.5 不同浓度PPi对多精入卵的影响 | 第106页 |
| 3.6 不同浓度E2抑制剂对多精入卵影响 | 第106-107页 |
| 3.7 不同浓度DUBs抑制剂对多精入卵影响 | 第107-108页 |
| 4 讨论 | 第108-111页 |
| 5 小结 | 第111-112页 |
| 结论 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-142页 |
| 致谢 | 第142-143页 |
| 附录一 英文简写缩略表 | 第143-146页 |
| 附录二 | 第146页 |
| 个人简介 | 第146页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第146页 |
