| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略语对照表 | 第11-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-27页 |
| 1.1 致病细菌 | 第15-17页 |
| 1.1.1 致病菌综述 | 第15-16页 |
| 1.1.2 铜绿假单胞菌 | 第16-17页 |
| 1.2 抗生素 | 第17-18页 |
| 1.2.1 抗生素的发现与现状 | 第17页 |
| 1.2.2 青霉素类抗生素 | 第17-18页 |
| 1.2.3 羧苄青霉素 | 第18页 |
| 1.3 菌毛(Type Ⅳ Pili,T4P) | 第18-23页 |
| 1.3.1 Type Ⅳ Pili的蛋白组成 | 第19-20页 |
| 1.3.2 菌毛分泌蛋白:通向外膜的大门 | 第20-21页 |
| 1.3.3 菌毛纤丝的形成 | 第21页 |
| 1.3.4 菌毛能量来源 | 第21页 |
| 1.3.5 菌毛排列亚基 | 第21-23页 |
| 1.4 菌毛、蹭行运动及抗生素关系 | 第23-24页 |
| 1.4.1 菌毛的介导的twitching运动 | 第23-24页 |
| 1.4.2 菌毛介导的青霉素类抗生素抗性 | 第24页 |
| 1.5 研究内容及意义 | 第24-27页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第27-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-31页 |
| 2.1.1 PA临床菌株收集 | 第27-28页 |
| 2.1.2 实验室PA突变体菌株 | 第28-29页 |
| 2.1.3 引物 | 第29-31页 |
| 2.1.4 培养基配方 | 第31页 |
| 2.2 基本实验方法 | 第31-39页 |
| 2.2.1 感受态细胞10B的制备 | 第31页 |
| 2.2.2 Twitching运动的检测 | 第31-32页 |
| 2.2.3 透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,TEM) | 第32页 |
| 2.2.4 滤纸片宏观检测抗生素抗性 | 第32-33页 |
| 2.2.5 液体测定菌株Car最低抑制浓度(Minimal Inhibitory Concentration,MIC) | 第33-34页 |
| 2.2.6 目的基因的获取 | 第34-35页 |
| 2.2.7 供体质粒pEX18Tc的获取 | 第35页 |
| 2.2.8 酶切、连接 | 第35页 |
| 2.2.9 电转化 | 第35-36页 |
| 2.2.10 三亲株 | 第36-37页 |
| 2.2.11 缺失突变体的构建 | 第37-39页 |
| 第三章 实验结果 | 第39-63页 |
| 3.1 实验室菌株 | 第39-49页 |
| 3.1.1 转座突变体PA4554 M中T4P与Car分析图 | 第39-40页 |
| 3.1.2 PAO1突变体透射电子显微镜TEM图 | 第40-42页 |
| 3.1.3 PAO1敲除突变体twitching表型 | 第42页 |
| 3.1.4 PAO1转座突变体twitching表型 | 第42-43页 |
| 3.1.5 PAO1敲除突变体Car抗性 | 第43-44页 |
| 3.1.6 PAO1转座突变体Car抗性 | 第44-49页 |
| 3.2 临床菌株 | 第49-55页 |
| 3.3.1 获取临床菌株 | 第50页 |
| 3.3.2 PA临床菌株twitching表型的测定 | 第50-51页 |
| 3.3.3 PA临床菌株羧苄青霉素Car抗性的测定 | 第51-55页 |
| 3.3 与T4P相关基因突变体 | 第55-63页 |
| 3.2.1 菌毛相关基因缺失突变体的构建 | 第55-57页 |
| 3.2.2 菌毛敲除突变体twitching表型 | 第57-58页 |
| 3.2.3 菌毛敲除突变体Car抗性表型 | 第58-59页 |
| 3.2.4 双敲除突变体△pilY_1△pilA | 第59-61页 |
| 3.2.5 △pilD、△pilB和△pilY_1△pilA的菌毛电镜 | 第61-62页 |
| 3.2.6 pilY_1转座突变体PA4554 M插入位点分析 | 第62-63页 |
| 第四章 讨论及结论 | 第63-67页 |
| 4.1 PAO1中T4P与羧苄青霉素抗性之间存在联系 | 第63-64页 |
| 4.2 T4P特异性的改变羧苄青霉素抗性 | 第64页 |
| 4.3 PA临床菌株中T4P与羧苄青霉素抗性之间的联系 | 第64-65页 |
| 4.4 T4P菌毛结构基因的敲除突变体 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
