摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-8页 |
1 文献综述 | 第12-19页 |
1.1 表观遗传学 | 第12页 |
1.2 DNA甲基化概述 | 第12-14页 |
1.3 DNA甲基化的研究手段 | 第14-15页 |
1.4 外套膜研究基础 | 第15-16页 |
1.5 国内外研究进展 | 第16-17页 |
1.6 本研究的目的和意义 | 第17-19页 |
2 马氏珠母贝外套膜不同区域基因组DNA甲基化MSAP分析 | 第19-31页 |
2.1 材料与方法 | 第19-22页 |
2.1.1 实验动物及材料 | 第19页 |
2.1.2 主要耗材与试剂 | 第19-20页 |
2.1.3 主要试剂和溶液的配制 | 第20页 |
2.1.4 主要仪器 | 第20-21页 |
2.1.5 引物信息 | 第21-22页 |
2.2 实验方法 | 第22-25页 |
2.2.1 总DNA的提取 | 第22页 |
2.2.2 MSAP分析 | 第22-23页 |
2.2.3 甲基化修饰片段的回收、克隆及测序 | 第23-24页 |
2.2.4 序列筛选、比对和分析 | 第24页 |
2.2.5 总RNA的提取 | 第24-25页 |
2.2.6 cDNA第一链的合成 | 第25页 |
2.2.7 荧光定量PCR | 第25页 |
2.3 实验结果 | 第25-28页 |
2.3.1 MSAP扩增结果及DNA甲基化修饰水平分析 | 第25-27页 |
2.3.2 DNA甲基化修饰片段序列分析 | 第27-28页 |
2.3.3 筛选片段的定量分析 | 第28页 |
2.4 分析与讨论 | 第28-31页 |
3 DNA甲基化免疫共沉淀测序及分析 | 第31-41页 |
3.1 实验材料 | 第31页 |
3.1.1 实验动物及材料 | 第31页 |
3.1.2 主要耗材与试剂 | 第31页 |
3.1.3 主要试剂和溶液的配制 | 第31页 |
3.1.4 主要仪器 | 第31页 |
3.2 实验方法 | 第31-33页 |
3.2.1 DNA甲基化免疫共沉淀技术(MeDIP-Seq) | 第31-33页 |
3.2.2 荧光定量PCR | 第33页 |
3.3 实验结果 | 第33-39页 |
3.3.1 数据处理与产出情况统计 | 第33-38页 |
3.3.2 筛选基因 | 第38-39页 |
3.3.3 荧光定量PCR结果 | 第39页 |
3.4 讨论与分析 | 第39-41页 |
4 髓样分化因子88的功能研究 | 第41-63页 |
4.1 实验材料 | 第41-42页 |
4.1.1 实验动物与材料 | 第41页 |
4.1.2 主要耗材与试剂 | 第41页 |
4.1.3 主要试剂和溶液的配制 | 第41页 |
4.1.4 主要仪器 | 第41页 |
4.1.5 引物信息 | 第41-42页 |
4.2 实验方法 | 第42-51页 |
4.2.1 总RNA的提取 | 第42页 |
4.2.2 中间片段的克隆 | 第42页 |
4.2.3 RACE片段扩增 | 第42-44页 |
4.2.4 基因的生物信息学分析 | 第44-45页 |
4.2.5 荧光定量PCR | 第45页 |
4.2.6 脂多糖刺激实验 | 第45页 |
4.2.7 原位杂交 | 第45-46页 |
4.2.8 体外microRNA过表达实验 | 第46-47页 |
4.2.9 载体构建 | 第47-51页 |
4.3 实验结果 | 第51-61页 |
4.3.1 基因的基本特征 | 第51-53页 |
4.3.2 生物信息学分析 | 第53-56页 |
4.3.3 组织表达差异分析 | 第56-57页 |
4.3.4 脂多糖刺激结果分析 | 第57页 |
4.3.5 Pm-MyD88基因在血细胞中的定位 | 第57-58页 |
4.3.6 信号通路的验证 | 第58-59页 |
4.3.7 Pm-MyD88调控miRNA的筛选 | 第59页 |
4.3.8 靶向关系验证 | 第59-61页 |
4.4 讨论与分析 | 第61-63页 |
5 甲基化转移酶DNMT的克隆及表达分析 | 第63-81页 |
5.1 实验材料 | 第63-64页 |
5.1.1 实验动物与材料 | 第63页 |
5.1.2 主要耗材与试剂 | 第63页 |
5.1.3 主要试剂和溶液的配制 | 第63页 |
5.1.4 主要仪器 | 第63页 |
5.1.5 引物信息 | 第63-64页 |
5.2 实验方法 | 第64-65页 |
5.2.1 总RNA的提取 | 第64页 |
5.2.2cDNA第一链的合成 | 第64页 |
5.2.3 基因片段的克隆 | 第64页 |
5.2.4 RACE片段扩增 | 第64页 |
5.2.5 基因的生物信息学分析 | 第64页 |
5.2.6 荧光定量PCR | 第64-65页 |
5.2.7 地西他滨处理 | 第65页 |
5.3 实验结果 | 第65-78页 |
5.3.1 基因的基本特征 | 第65-74页 |
5.3.1.1 Pm-Dnmt1序列特征分析 | 第65-68页 |
5.3.1.2 Pm-Dnmt1b序列特征分析 | 第68-70页 |
5.3.1.3 Pm-Dnmt3a序列特征分析 | 第70-72页 |
5.3.1.4 Pm-Dnmt3b序列特征分析 | 第72-74页 |
5.3.2 组织表达差异分析 | 第74-76页 |
5.3.2.1 Pm-Dnmt1基因的组织差异表达分析 | 第74页 |
5.3.2.2 Pm-Dnmt1b基因的组织差异表达分析 | 第74-75页 |
5.3.2.3 Pm-Dnmt3a基因的组织差异表达分析 | 第75页 |
5.3.2.4 Pm-Dnmt3b基因的组织差异表达分析 | 第75-76页 |
5.3.3 地西他滨处理结果 | 第76-78页 |
5.4 讨论与分析 | 第78-81页 |
6 结论 | 第81-82页 |
参考文献 | 第82-91页 |
致谢 | 第91-92页 |
作者简介 | 第92-93页 |
导师简介 | 第93页 |