| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-10页 |
| 第一章 综述 | 第14-25页 |
| 一、GAAP1(Golgi anti-apoptotic protein 1)与植物细胞程序性死亡(PCD) | 第14-20页 |
| 1. 细胞凋亡 | 第14-18页 |
| 1.1 细胞凋亡的主要分子机制 | 第14-15页 |
| 1.2 ER-stress和细胞凋亡 | 第15-17页 |
| 1.3 细胞抗凋亡因子 | 第17页 |
| 1.4 细胞凋亡与植物生长发育 | 第17-18页 |
| 2. GAAP在细胞凋亡中的作用 | 第18-20页 |
| 二、蛋白质与蛋白质相互作用及其研究方法 | 第20-24页 |
| 1. 蛋白质与蛋白质相互作用 | 第20-21页 |
| 2. 研究蛋白质相互作用的方法 | 第21-24页 |
| 2.1 免疫共沉淀法 | 第21页 |
| 2.2 荧光共定位法 | 第21-22页 |
| 2.3 GST-Pull down法 | 第22-23页 |
| 2.4 酵母双杂交法 | 第23-24页 |
| 2.5 其他方法 | 第24页 |
| 三、本课题研究的目的及意义 | 第24-25页 |
| 第二章 研究内容 | 第25-63页 |
| 第一节 GAAP1与潜在互作因子相互作用的验证 | 第25-45页 |
| 1. 前言 | 第25-26页 |
| 2. 材料与方法 | 第26-33页 |
| 2.1 质粒和菌株 | 第26-27页 |
| 2.2 酶和试剂 | 第27页 |
| 2.3 pMon530-eYFP-GAAP1克隆及农杆菌菌株的构建 | 第27-28页 |
| 2.3.1 pMon530-eYFP-GAAP1克隆的构建 | 第27页 |
| 2.3.2 pMon530-eYFP-GAAP1农杆菌菌株的构建及鉴定 | 第27-28页 |
| 2.4 pMon530-eYFP-AtWLIM2b克隆及农杆菌菌株的构建 | 第28-29页 |
| 2.4.1 目的片段的获得 | 第28页 |
| 2.4.2 pMon530-eYFP-AtWLIM2b克隆的构建 | 第28页 |
| 2.4.3 pMon530-eYFP-AtWLIM2b农杆菌菌株的构建及鉴定 | 第28-29页 |
| 2.5 pHB-X-YFP、pHB-CFP-X和pHB-X-CFP克隆及农杆菌菌株的构建 | 第29-30页 |
| 2.5.1 pHB-GAAP1-YFP/CFP克隆及农杆菌的构建 | 第29页 |
| 2.5.2 pHB-AtWLIM2b-YFP/CFP克隆及农杆菌的构建 | 第29页 |
| 2.5.3 pHB-MAPR3-YFP/CFP、pHB-CFP-MAPR3克隆及农杆菌的构建 | 第29-30页 |
| 2.6 pM530-TAP-X克隆及农杆菌菌株的构建 | 第30-31页 |
| 2.7 荧光共定位观察 | 第31页 |
| 2.8 GST-pull down | 第31-33页 |
| 3. 实验结果 | 第33-44页 |
| 3.1 GAAP1与AtWLIM2b,MAPR3和PAS荧光定位分析 | 第33-40页 |
| 3.1.1 GAAP1、AtWLIM2b和MAPR3与各种荧光蛋白融合表达克隆的构建 | 第33-36页 |
| 3.1.2 GAAP1与AtWLIM2b,MAPR3和PAS共定位分析 | 第36-40页 |
| 3.2 AtWLIM2b、PAS和MAPR3与GAAP1相互作用的体外GST-Pulldown验证 | 第40-44页 |
| 3.2.1 AtWLIM2b-TAP、PAS-TAP、MAPR3-TAP和GST-GAAP1表达克隆的构建 | 第40-42页 |
| 3.2.2 GST-GAAP1重组蛋白体外表达与纯化 | 第42-44页 |
| 3.2.3 AtWLIM2b-TAP、PAS-TAP和MAPR3-TAP与GST-GAAP1结合的GST-Pull down的验证 | 第44页 |
| 4. 本节小结 | 第44-45页 |
| 第二节 拟南芥GAAP1互作因子缺失突变体的构建及功能分析 | 第45-63页 |
| 1. 前言 | 第45页 |
| 2. 材料与方法 | 第45-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第45-46页 |
| 2.2 实验方法 | 第46-47页 |
| 2.2.1 植物材料培养与处理 | 第46-47页 |
| 2.2.2 eYFP-GAAP1、eYFP-AtWLIM2b和eYFP拟南芥稳定转化子构建及鉴定 | 第47页 |
| 2.2.3 荧光共聚焦显微镜观察 | 第47页 |
| 3. 实验结果 | 第47-61页 |
| 3.1 eYFP-GAAP1和eYFP-AtWLIM2b拟南芥稳定转化子中荧光定位的观察 | 第47-52页 |
| 3.1.1 eYFP-GAAP1和AtWLIM2b-eYFP拟南芥稳定转化子的构建 | 第47-50页 |
| 3.1.2 GAAP1-eYFP和AtWLIM2b-eYFP稳定转化子荧光定位观察 | 第50-52页 |
| 3.2 T-DNA插入突变体的鉴定 | 第52-54页 |
| 3.3 Atwlim2b-1的NaCl、TM和DTT敏感性分析 | 第54-57页 |
| 3.4 MAPR3突变对拟南芥生长发育和对DTT的敏感性影响的分析 | 第57-58页 |
| 3.5 Atwlim2b-1/gaap1双突变体纯合子拟南芥的构建 | 第58-59页 |
| 3.6 Atwlim2b-1/gaap1双突变体发育和DTT敏感性分析 | 第59-61页 |
| 4. 本节小结 | 第61-63页 |
| 全文总结与讨论 | 第63-65页 |
| 附录 | 第65-78页 |
| 附录1 实验方法 | 第65-73页 |
| 附录2 缩略词表 | 第73-75页 |
| 附录3 试验所用引物序列 | 第75-76页 |
| 附录4 所用大肠杆菌菌种编号 | 第76-77页 |
| 附录5 攻读硕士期间参与的科研项目和取得的成果 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
