| 摘要 | 第5-8页 |
| abstract | 第8-10页 |
| 符号说明 | 第11-14页 |
| 绪论 | 第14-30页 |
| 1. 前言 | 第14页 |
| 2. 流感病毒简介 | 第14-19页 |
| 2.1 流感概述 | 第14-15页 |
| 2.2 禽流感病毒 | 第15-16页 |
| 2.3 禽流感在其天然宿主体内的致病机理病毒 | 第16页 |
| 2.4 猪流感病毒 | 第16-17页 |
| 2.5 猪流感病毒在其天然宿主中的致病机理 | 第17-18页 |
| 2.6 人流感病毒 | 第18页 |
| 2.7 人流感病毒在其天然宿主内的致病机理 | 第18-19页 |
| 3 流感病毒跨越种间屏障传播机理 | 第19-20页 |
| 3.1 抗原性变异的机理 | 第19页 |
| 3.2 分子机理 | 第19-20页 |
| 3.3 流感病毒跨种间传播的其他影响因素 | 第20页 |
| 4 禽流感和猪流感的流行病学 | 第20-22页 |
| 4.1 禽流感 | 第21页 |
| 4.2 猪流感 | 第21-22页 |
| 5 猪是否作为禽流感传染给人的中间宿主 | 第22-23页 |
| 6 分子生物学研究进展 | 第23-26页 |
| 6.1 聚合酶蛋白(Polymerse) | 第23-24页 |
| 6.2 血凝素(Hemagglutinin,HA) | 第24-25页 |
| 6.3 核蛋白(Nucleoprotein,NP) | 第25页 |
| 6.4 神经氨酸酶(Neuraminidase,NA) | 第25页 |
| 6.5 基质蛋白(Matrix Protein,M) | 第25-26页 |
| 6.6 非结构蛋白(Nonstructural Protein,NS) | 第26页 |
| 7 传统的实验室诊断技术 | 第26-28页 |
| 7.1 电镜技术 | 第26-27页 |
| 7.2 病毒的分离和鉴定 | 第27页 |
| 7.3 血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验 | 第27页 |
| 7.4 琼脂凝胶扩散试验 | 第27页 |
| 7.5 免疫荧光法(immunofluorescence assay,IFA) | 第27-28页 |
| 7.6 酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) | 第28页 |
| 8 分子诊断技术 | 第28-29页 |
| 8.1 RT-PCR法 | 第28页 |
| 8.2 实时荧光定量PCR | 第28-29页 |
| 8.3 基因芯片技术 | 第29页 |
| 8.4 高通量流感筛查与检测系统 | 第29页 |
| 9 研究目的及意义 | 第29-30页 |
| 第一章 上海及周边地区实验用猪和犬流感的流行病学调查 | 第30-39页 |
| 1 材料 | 第30-31页 |
| 1.1 样品的采集 | 第30页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第30-31页 |
| 1.3 引物的合成 | 第31页 |
| 2 实验方法 | 第31-34页 |
| 2.1 咽拭子的RT-PCR法检测 | 第31-33页 |
| 2.2 ELISA法检测血清中的流感病毒抗体 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-36页 |
| 3.1 样品经PCR初步鉴定分析 | 第34页 |
| 3.2 阳性克隆菌株筛选 | 第34-35页 |
| 3.3 测序分析 | 第35-36页 |
| 3.4 ELISA检测结果 | 第36页 |
| 3.5 RT-PCR法和ELISA法检测结果比较 | 第36页 |
| 4 小结与讨论 | 第36-39页 |
| 第二章 禽流感病毒H5、H7和H9多重RT-PCR方法的建立 | 第39-52页 |
| 1 材料 | 第39-40页 |
| 1.1 毒株 | 第39-40页 |
| 1.2 主要实验试剂及仪器 | 第40页 |
| 1.3 其他 | 第40页 |
| 2 实验方法 | 第40-44页 |
| 2.0 引物的设计合成 | 第40-41页 |
| 2.1 病毒增殖 | 第41页 |
| 2.2 病毒总RNA的提取 | 第41页 |
| 2.3 模板的第一链cDNA的合成(RT) | 第41页 |
| 2.4 单项的PCR体系及程序 | 第41-42页 |
| 2.5 单项PCR体系的优化 | 第42页 |
| 2.6 多重PCR体系的建立及优化 | 第42页 |
| 2.7 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第42页 |
| 2.8 PCR产物切胶回收 | 第42页 |
| 2.9 连接载体转化受体菌 | 第42-43页 |
| 2.10 单克隆菌落的筛选鉴定 | 第43页 |
| 2.11 测序 | 第43页 |
| 2.12 多重RT-PCR反应的特异性测定 | 第43页 |
| 2.13 多重RT-PCR反应的敏感度测定 | 第43-44页 |
| 3 结论 | 第44-49页 |
| 3.1 单重RT-PCR的建立 | 第44-45页 |
| 3.2 多重RT-PCR体系的建立及优化 | 第45-48页 |
| 3.3 多重PCR反应体系的特异性检测 | 第48-49页 |
| 3.4 多重PCR反应体系的灵敏度检测 | 第49页 |
| 4 小结与讨论 | 第49-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 课题来源 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第61-62页 |
| 附录 | 第62-64页 |
