| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 前言 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-16页 |
| 1.1 有毒中药简介 | 第9页 |
| 1.2 狼毒的研究进展 | 第9-10页 |
| 1.3 瑞香狼毒的化学成分与药理活性 | 第10-12页 |
| 1.3.1 瑞香狼毒主要化学成分 | 第10-11页 |
| 1.3.2 瑞香狼毒的药理活性 | 第11-12页 |
| 1.4 NCA 的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.5 K_V1.4 钾离子通道与膜片钳技术 | 第13-16页 |
| 1.5.1 钾离子通道 | 第13-14页 |
| 1.5.2 电压门控钾离子通道 | 第14页 |
| 1.5.3 K_V1.4 钾离子通道 | 第14-16页 |
| 2 NCA对K_V1.4 钾离子通道电流的阻断 | 第16-32页 |
| 2.1 材料及试剂 | 第16-20页 |
| 2.1.1 试验细胞 | 第16页 |
| 2.1.2 试验主要药品及试剂 | 第16-20页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第20页 |
| 2.2 试验相关试剂配制 | 第20-22页 |
| 2.3 试验方法 | 第22-24页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第22-23页 |
| 2.3.2 全细胞膜片钳试验 | 第23-24页 |
| 2.4 试验结果 | 第24-31页 |
| 2.4.1 NCA浓度依赖性阻断K_V1.4 钾离子通道电流 | 第24-26页 |
| 2.4.2 NCA对K_V1.4 钾离子通道电流阻断作用的频率依赖性 | 第26-27页 |
| 2.4.3 NCA对K_V1.4 钾离子通道电流恢复曲线的影响 | 第27-28页 |
| 2.4.4 NCA对K_V1.4 钾离子通道稳态失活影响 | 第28-29页 |
| 2.4.5 NCA对K_V1.4 钾离子通道Onset影响 | 第29-30页 |
| 2.4.6 NCA对K_V1.4 钾离子通道电流-电压（IV）曲线的影响 | 第30-31页 |
| 2.5 讨论 | 第31-32页 |
| 3 NCA对K_V1.4 钾离子通道突变体的作用 | 第32-47页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第32-33页 |
| 3.1.1 试验细胞 | 第32页 |
| 3.1.2 菌株 | 第32页 |
| 3.1.3 质粒 | 第32页 |
| 3.1.4 试验主要药品及试剂 | 第32页 |
| 3.1.5 主要仪器设备 | 第32-33页 |
| 3.2 试剂配制 | 第33-34页 |
| 3.2.1 LB培养基的配制 | 第33页 |
| 3.2.2 琼脂糖凝胶电泳相关试剂的配制 | 第33-34页 |
| 3.3 试验方法 | 第34-44页 |
| 3.3.1 K_V1.4 钾离子通道基因序列分析及突变引物设计 | 第34-38页 |
| 3.3.2 PCR定点突变试验 | 第38-40页 |
| 3.3.3 PCR产物Dpn1酶切反应 | 第40页 |
| 3.3.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第40-41页 |
| 3.3.5 DNA凝胶回收及纯化 | 第41页 |
| 3.3.6 感受态的制备和 PCR 产物的转化 | 第41-42页 |
| 3.3.7 大肠杆菌的培养及扩繁 | 第42页 |
| 3.3.8 质粒提取及测序 | 第42-43页 |
| 3.3.9 细胞转染 | 第43-44页 |
| 3.3.10 全细胞膜片钳试验 | 第44页 |
| 3.4 试验结果 | 第44-46页 |
| 3.4.1 突变质粒的获得 | 第44页 |
| 3.4.2 NCA对K_V1.4 钾离子通道突变体的影响 | 第44-46页 |
| 3.5 讨论 | 第46-47页 |
| 4 NCA对K_V1.4 突变体K531A的作用 | 第47-49页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第47页 |
| 4.2 试验方法 | 第47页 |
| 4.3 试验结果 | 第47-48页 |
| 4.3.1 K531A位点突变成功 | 第47页 |
| 4.3.2 NCA对K_V1.4 突变体K531A的作用 | 第47-48页 |
| 4.4 讨论 | 第48-49页 |
| 5 总论 | 第49-50页 |
| 6 结论与展望 | 第50-51页 |
| 6.1 结论 | 第50页 |
| 6.2 展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 作者简介 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
